環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)弓形蟲(chóng)方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的：建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)單快速、低成本檢測(cè)弓形蟲(chóng)DNA的方法。 方法：采用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技術(shù)建立了檢測(cè)弓形蟲(chóng)DNA的方法，并進(jìn)行特異性、敏感性評(píng)估，在此基礎(chǔ)上建立依據(jù)SYBR Green I的定量方法及通過(guò)顯色反應(yīng)直接判斷結(jié)果的簡(jiǎn)便方法。為驗(yàn)證我們建立方法的臨床應(yīng)用價(jià)值，最后用建立的方法對(duì)57例孕婦外周血標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè)。

2、 結(jié)果：通過(guò)對(duì)建立的LAMP擴(kuò)增弓形蟲(chóng)DNA反應(yīng)體系的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)鎂離子影響較大，其它如甜菜堿、溫度等影響不大。特異性評(píng)估表明僅弓形蟲(chóng)檢測(cè)陽(yáng)性，而豬肉絳蟲(chóng)、血吸蟲(chóng)等寄生蟲(chóng)檢測(cè)為陰性，酶切鑒定結(jié)果進(jìn)一步證明了擴(kuò)增的特異性。敏感性檢測(cè)下限為每反應(yīng)管10拷貝。以重組質(zhì)粒制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線顯示，循環(huán)閾值與模板濃度有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.929，擴(kuò)增效率0.961。對(duì)57例孕婦標(biāo)本檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)2例陽(yáng)性，定量檢測(cè)值均約103拷貝/μl。 結(jié)論