雙配體修飾殼聚糖藥物載體的合成及肝靶向性能研究.pdf

1、目前,國內(nèi)外關于肝靶向給藥系統(tǒng)中藥物載體的研究主要集中在單配體修飾的載藥納米粒子方面。然而,單個配體修飾的納米粒子在進行受體-配體相互作用時易受到許多病理及生理條件的變化而變化,這種變化會導致受體特異性識別能力和結(jié)合活性降低,針對這種情況,本文提出了一種雙配體修飾的藥物載體材料,期望能提高主動靶向的可靠性,豐富肝靶向給藥系統(tǒng)的內(nèi)容。
　　 本文將具有肝靶向性的配體甘草次酸(GA)和乳糖酸(LA)偶聯(lián)到殼聚糖(CTS)上,首次成功

2、合成了雙配體修飾殼聚糖材料—乳糖酸化甘草次酸殼聚糖(GCGA),該材料結(jié)構(gòu)未見文獻報道。通過MTT實驗考察了材料的細胞毒性,并用FITC標記的殼聚糖納米粒子(FITC-CTS NPs)、甘草次酸殼聚糖納米粒子(FITC-GA-CTS NPs)和GCGA納米粒子(FITC-GCGA NPs)研究了GCGA肝靶向性能,并分析了GCGA NPs的主動靶向機制。在中心復合設計研究中,優(yōu)化了GCGA/5-Fu NPs的制備條件,探討了GCGA/5

3、-Fu NPs的體外釋放特性。得到如下結(jié)論:
　　 (1)紅外光譜(IR)、核磁共振氫譜(1H-NMR)、接觸角測試和MTT實驗結(jié)果表明,GA和LA通過酰胺鍵成功連接到CTS,取代度分別為13.77mol％和16.74mol%;GCGA是一種親水性較強的具有疏水性GA基團和親水性LA基團的兩親性藥物載體材料,可通過自組裝法得到納米粒子;GCGA對小鼠成纖維細胞的(L929)的毒性與其濃度的高低具有一定的關系,GCGA的濃度在0.

4、005-0.05mg/ml范圍內(nèi)時,無細胞毒副作用。
　　 (2)體外細胞攝取實驗結(jié)果表明,FITC-GCGA NPs進入肝癌細胞和去唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)及甘草次酸受體介導的內(nèi)吞作用有關,當一種受體介導的內(nèi)吞作用因某種病理生理原因受阻時,還有另一種配體-受體的相互作用,增加了細胞的攝取途徑;BEL-7402肝癌細胞攝取GCGA納米粒子的量是LO2正常肝細胞的18.22倍,GCGA納米粒子對肝癌細胞具有更強的親和性。大

5、鼠體內(nèi)分布研究顯示,FITC-GCGA NPs對心、腦和骨骼肌沒有毒副作用,而且較FITC-CTS NPs和FITC-GA-CTS NPs,FITC-GCGA NPs主要在大鼠肝臟富集,具有更強的肝靶向性。因此,GCGA可以作為一種有應用前景的肝癌靶向性藥物載體材料。
　　 (3)中心復合設計優(yōu)化CTS載5-Fu納米粒子(CTS/5-Fu NPs)的平均粒徑和載藥量,以及以此為模型,制備了GCGA/5-Fu NPs,實驗結(jié)果表明

6、:5-Fu/CTS對平均粒徑和載藥量具有顯著的影響;GCGA/5-Fu NPs的形貌均呈圓整球形,平均粒徑為239.9nm(分布范圍在100-500nm),分布均勻(多分散指數(shù)為0.04),zeta電位為+21.2mV,載藥量為3.90%(w/v)。GCGA/5-Fu NPs體外釋放研究結(jié)果顯示,GCGA/5-Fu NPs在PBS緩沖溶液(pH=7.4)釋放過程大致分為四個階段,即突釋、緩釋、二次突釋,最后是一個非常緩慢的釋放階段。其緩