細(xì)胞傳感器的構(gòu)建及其在細(xì)胞表面糖表達(dá)分析中的應(yīng)用.pdf

1、細(xì)胞表面含有豐富的聚糖。其功能比較復(fù)雜，參與了絕大部分真核生物的生命過(guò)程。細(xì)胞表面糖表達(dá)的分析與檢測(cè)對(duì)幫助我們理解和揭示其生理功能意義重大。本論文主要內(nèi)容如下:
　　(1)合成了樹枝狀高分子-石墨烯納米材料。基于樹狀高分子PAMAM(DEN)末端氨基與氧化石墨烯(GO)表面功能基團(tuán)羧基、環(huán)氧基的共價(jià)交聯(lián)，將球狀DEN修飾在GO表面獲得功能化的氧化石墨烯復(fù)合物。利用水合肼的還原性，將該GO還原為石墨烯(rGO)，得到rGO-DEN復(fù)

2、合材料。實(shí)驗(yàn)證明該材料具有較好的穩(wěn)定性，能為電極界面生物分子的修飾提供多價(jià)結(jié)合作用。同時(shí)，也為接下來(lái)細(xì)胞傳感器的構(gòu)建提供一種較好的修飾材料。
　　(2)構(gòu)建了一種細(xì)胞電化學(xué)傳感器用于細(xì)胞表面N-聚糖表達(dá)的檢測(cè)。該傳感器利用了能識(shí)別細(xì)胞表面N-聚糖的伴刀豆凝集素(ConA)，合成的rGO-DEN納米材料，以及辣根過(guò)氧化物酶-適配體-納米金（HRP-aptamer-AuNPs）信標(biāo)。電極表面修飾的rGO-DEN，不僅能提高電極界面的電

3、子傳遞效率，還能為細(xì)胞捕獲提供多價(jià)識(shí)別作用。納米信標(biāo)不但可為實(shí)驗(yàn)提供電化學(xué)探針，還能提高該細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的選擇性。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，該細(xì)胞電化學(xué)傳感器能靈敏地檢測(cè)人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(CCRF-CEM)并應(yīng)用于細(xì)胞表面N-聚糖抑制劑的分析。檢測(cè)限低至10cellmL-1。該高選擇性傳感器在藥物篩選方面有重要應(yīng)用，也能夠?yàn)槔斫饽承┥镞^(guò)程和相關(guān)疾病中N-聚糖的作用提供新思路。
　　(3)發(fā)展了一種堿性磷酸酶(ALP)響應(yīng)的電化學(xué)發(fā)光(EC

4、L)猝滅適配體傳感器用于動(dòng)態(tài)分析細(xì)胞表面N-聚糖的表達(dá)。首先，電極界面修飾的rGO-DEN納米材料用于固定適配體，發(fā)揮多價(jià)識(shí)別和信號(hào)放大的作用，從而高選擇性地捕獲細(xì)胞。同時(shí)，納米信標(biāo)ALP-ConA-AuNPs作為細(xì)胞表面N-聚糖表達(dá)的檢測(cè)探針，利用了ConA對(duì)細(xì)胞表面N-聚糖核心結(jié)構(gòu)三甘露聚糖的識(shí)別以及ALP響應(yīng)的釕聯(lián)吡啶電化學(xué)發(fā)光猝滅。通過(guò)該方法，可以檢測(cè)低至38cellsmL-1的CCRF-CEM細(xì)胞。該傳感器實(shí)現(xiàn)了在血清中的細(xì)胞