新鮮煙葉中的酚類(lèi)物質(zhì)研究.pdf

1、建立了煙葉中25種酚類(lèi)物質(zhì)的高效液相色譜-紫外/質(zhì)譜(HPLC-UV/MS)聯(lián)合測(cè)定方法，其中11種主要酚類(lèi)物質(zhì)采用HPLC-UV法進(jìn)行內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法絕對(duì)定量分析，其余酚類(lèi)物質(zhì)采用HPLC-MS法進(jìn)行內(nèi)標(biāo)校正半定量分析。HPLC-UV法以Symmetry C18色譜柱為固定相，流動(dòng)相A為水/甲醇/乙酸(44/5/1，v/v/v)，B為甲醇/水/乙酸(44/5/1，v/v/v)，梯度洗脫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm; HPLC-MS法以A

2、gilent SB-AQ色譜柱為固定相，流動(dòng)相A為0.1％乙酸水，B為乙腈，梯度洗脫，采用電噴霧電離四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(ESI-Q-TOF)進(jìn)行定性定量。方法驗(yàn)證結(jié)果表明:11種酚類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在0.90～99.00μg/mL的范圍內(nèi)（綠原酸及蕓香苷為0.95～380.00μg/mL）的線性相關(guān)系數(shù)在0.9993～0.9999之間。在22.5～24.8、45.0～49.5、67.5～74.3μg/mL3個(gè)水平的加標(biāo)回收率為91.0％～112

3、.4％。方法重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.48％～13.40％之間，日內(nèi)日間精密度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.35‰15.54％。本方法已應(yīng)用于批量煙葉樣品檢測(cè)。
　　利用軟件SIMCA-P11.5及SPSS16.0對(duì)濃香型、清香型、中間香型94份成熟期新鮮煙葉樣品中的酚類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行了數(shù)據(jù)分析，偏最小二乘判別分析(PLS-DA)結(jié)果表明三種香型間有明顯的分離趨勢(shì)，其中濃香型與中間香型較接近，清香型獨(dú)立分為一類(lèi);分層聚類(lèi)(HCA)也得到相同的結(jié)果

4、。兩兩香型通過(guò)非參數(shù)檢驗(yàn)(p＜0.05)結(jié)合PLS-DA模型的分類(lèi)貢獻(xiàn)值(VIP＞1)得到不同香型間12種酚類(lèi)差異代謝物。另外將酚類(lèi)物質(zhì)與各地的生育期氣候條件做相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)莨菪苷、蕓香苷及蕓香苷Ⅱ、山奈酚苷及山奈酚苷Ⅱ與生育期氣候顯著相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)r＞0.6)。
　　研究了貴州、云南、河南的紅大、K326、中煙100三個(gè)品種不同生長(zhǎng)階段的197份新鮮煙葉樣品中的酚類(lèi)物質(zhì)。討論了遺傳、環(huán)境、遺傳與環(huán)境互作對(duì)酚類(lèi)物質(zhì)

5、代謝累積的影響。由PLS-DA得分圖及酚類(lèi)物質(zhì)含量隨生育期變化曲線看出，同一產(chǎn)地不同品種間酚類(lèi)物質(zhì)生育期累積有所不同，同一品種不同產(chǎn)地間的差異更大，說(shuō)明環(huán)境因素對(duì)酚類(lèi)物質(zhì)累積的影響大于遺傳因素。
　　建立了一種酚類(lèi)物質(zhì)用于代謝組學(xué)研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量判別方法。將蕓香苷與山奈酚苷含量的比值作為區(qū)分代謝組學(xué)合格樣品、變質(zhì)的不合格樣品及部分變質(zhì)的不合格樣品的標(biāo)準(zhǔn)，即待測(cè)樣品中蕓香苷與山奈酚苷含量的比值在6.4及以上的為合格樣品，可用