Cohn組分Ⅳ沉淀中血漿蛋白的分離工藝及過程自動化研究.pdf

1、本文研究了從血漿蛋白生產(chǎn)中的廢棄物Cohn組分Ⅳ沉淀(CohnⅣ沉淀)中，分離純化多種有藥用價值血漿蛋白的工藝。主要目標(biāo)為白蛋白(Albumin，HSA)、運(yùn)鐵蛋白(Transferrin，Tf)、α1-蛋白酶抑制劑(α1-antitrypsin，α1-AT)、抗凝血酶-Ⅲ(Antithrombin-Ⅲ，AT-Ⅲ)、結(jié)合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)等五種血漿蛋白。根據(jù)沉淀法和多維層析法相結(jié)合的思路，設(shè)計(jì)分離工藝，首先對沉淀進(jìn)行

2、預(yù)處理，然后通過多維層析技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了五種蛋白的便捷高效分離，并對其分離過程實(shí)現(xiàn)了自動化控制。
　　 首先研究CohnⅣ沉淀預(yù)處理方法，確定用生理鹽水溶解，離心和過濾除去固體助濾劑，再用聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)對蛋白溶液進(jìn)行沉淀，除去了分子量較大的蛋白雜質(zhì)，得到CohnⅣ沉淀預(yù)處理液。
　　 其次研究CohnⅣ沉淀預(yù)處理液的初步層析方法。比較了其在凝膠過濾層析，疏水層析和離子交換層析上的分離

3、效果。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)凝膠過濾層析和離子交換層析對這五種蛋白的分離效果不佳，無法起到初步篩分作用，而疏水層析的三個洗脫組分中的蛋白成分簡單，便于進(jìn)一步純化。因此，選擇了Octyl Sepharose4 Fast Flow(OctylFF)作為初步層析步驟，確定了階段洗脫的梯度為：20％、50％、100％，得到三個洗脫組分：第一組分主要含Tf；第二組分主要含α1-AT，Hp和部分的Tf;第三組分主要含AT-Ⅲ和HSA。
　　 接下來對疏水

4、層析的三個組分進(jìn)一步層析純化。第一組分經(jīng)過DEAEFastFlow(DEAEFF)純化，得到Tf產(chǎn)品活性收率為74％。第二組分用DEAEFF分離得到α1-AT產(chǎn)品和含Hp的組分，該組分再經(jīng)過凝膠過濾層析得到Hp產(chǎn)品。α1-AT和Hp活性收率分別為62％和40％。第三組分用肝素親和HeparinSepharose6FastFlow純化得AT-Ⅲ和白蛋白產(chǎn)品，活性收率分別為65％和87％。
　　 最后使用多維組合層析系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了這五