離子交換電色譜純化蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、本文將離子交換色譜和橫向交變電場(chǎng)耦合,研究了此種色譜柱應(yīng)用于卵清蛋白這個(gè)實(shí)際物系的分離性能,并研究了蛋白質(zhì)在該電色譜中的保留行為. 首先,利用填充Q Sepharose Fast Flow的橫向電場(chǎng)色譜柱實(shí)現(xiàn)了卵清蛋白這一實(shí)際物系的分離,得到了卵鐵傳遞蛋白和卵清白蛋白產(chǎn)品.前端分析研究表明,在30mA,1/20Hz的交變電場(chǎng)下,2mL的色譜柱上進(jìn)行卵清蛋白的上樣吸附,對(duì)于相同的穿透濃度,處理量能達(dá)到無(wú)電場(chǎng)時(shí)的2.33倍.用離子強(qiáng)

2、度階越洗脫實(shí)現(xiàn)不同蛋白的分離得到,加電場(chǎng)時(shí)進(jìn)樣7mL時(shí),卵鐵傳遞蛋白的純度為73.74﹪,濃縮率5.72,收率82.96﹪；卵清白蛋白的純度為90.14﹪,濃縮率1.67,收率91.13﹪.進(jìn)樣量達(dá)到穿透點(diǎn)的21mI,時(shí),得到的結(jié)果與進(jìn)樣7mL相比,濃縮率相當(dāng),收率略低.與無(wú)電場(chǎng)情況下進(jìn)樣量分別為3mL和9mL的分離效果相比,分離所得樣品的濃縮率稍有降低,收率基本一致.當(dāng)將色譜柱軸向放大三倍至6mL時(shí),加電場(chǎng)與不加電場(chǎng)仍以7:3的比例進(jìn)

3、樣,仍然能夠得到相近并較高的濃縮率和收率. 在考察橫向電色譜柱內(nèi)蛋白質(zhì)保留行為的研究中,以pH 4.0的條件確保BSA不會(huì)被DEAE Sepha,rose Fast Flow介質(zhì)吸附,通過(guò)實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析得到了柱效、保留體積、軸向擴(kuò)散系數(shù)等參數(shù).結(jié)果顯示,由于離子交換介質(zhì)表面和孔內(nèi)產(chǎn)生電滲流的作用,理論板高度隨電流強(qiáng)度的增大而減小,文章對(duì)電流交變周期對(duì)柱效的影響也做了考察.軸向擴(kuò)散系數(shù)與柱效的變化相關(guān)聯(lián),它的變化趨勢(shì)說(shuō)明橫向電色譜