人工分子伴侶-離子交換色譜法輔助還原變性蛋白質(zhì)的復(fù)性.pdf

1、高效且廉價(jià)的蛋白質(zhì)復(fù)性方法的研究一直是生物工程下游技術(shù)中的一個(gè)熱點(diǎn)。本文將離子交換色譜法(ion exchange chromatography，IEC)與人工分子伴侶法(artificial molecular chaperon，AMC)相結(jié)合，發(fā)展了人工分子伴侶-離子交換色譜法(AMC-IEC)，以脲變性/二硫蘇糖醇還原溶菌酶(lysozyme)為模型蛋白，研究該方法用于蛋白復(fù)性的效率，并將此方法應(yīng)用于重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rh

2、C-CSF)的復(fù)性。 本論文包括以下幾個(gè)部分： 1.文獻(xiàn)綜述：對(duì)研究蛋白質(zhì)復(fù)性的意義、蛋白復(fù)性方法及蛋白折疊液相色譜法、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子分離純化等方面進(jìn)行了綜述。共包括文獻(xiàn)97篇。 2.人工分子伴侶.離子交換色譜法復(fù)性還原變性溶菌酶：將IEC和AMC相結(jié)合，發(fā)展了AMC-IEC，并用于脲變性/二硫蘇糖醇還原溶菌酶的復(fù)性，對(duì)流動(dòng)相中脲濃度、流動(dòng)相中 -CD濃度、流動(dòng)相pH、流動(dòng)相流速、去垢劑與溶菌酶摩爾比、

3、去垢劑種類等進(jìn)行了優(yōu)化。與AMC和IEC相比，在實(shí)驗(yàn)考察的初始蛋白濃度范圍內(nèi)，AMC-IEC所得的活性回收率更高，同時(shí)，該方法對(duì)初始濃度很高的還原變性溶菌酶能得到較高的活性回收率。當(dāng)溶菌酶的初始濃度高達(dá)200 mg/mL時(shí)，其活性回收率仍能達(dá)到63％。另外，在AMC-IEC復(fù)性過程中，色譜柱的使用壽命比通常IEC方法更長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這種方法是一種高效和廉價(jià)的蛋白復(fù)性方法。 3.一步人工分子伴侶-離子交換色譜法輔助還原變性溶菌酶

4、的復(fù)性；以月桂?；“彼徕c(Sodium Lauroyl Sarcosine，Sarkosyl，SLS)作為蛋白變性劑，發(fā)展了一步人工分子伴侶.離子交換色譜法，對(duì)還原變性溶菌酶進(jìn)行了復(fù)性研究。對(duì)流動(dòng)相中脲濃度，流動(dòng)相中 -環(huán)糊精( -CD)濃度，流動(dòng)相pH，流動(dòng)相流速等復(fù)性條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相中脲濃度為3.0 mol/L， -CD濃度為8 mmol/L，流動(dòng)相pH為8.0并且流速為1 mL/min時(shí)，活性回收率最高。