由順丙烯磷酸到磷霉素的生物轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、磷霉素是一種具有獨(dú)特化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗菌機(jī)制的抗生素。目前以對稱性化學(xué)合成技術(shù)生產(chǎn)磷霉素，探索不對稱性的生物轉(zhuǎn)化或化學(xué)合成技術(shù)是一個研究熱點(diǎn)。 本實驗室已篩選得到能將底物順丙烯磷酸(cPA)轉(zhuǎn)化合成磷霉素(FOM)菌株F79(Bacillusfusiformis)，由于該菌株的磷霉素產(chǎn)率及產(chǎn)量較低而無法實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，本論文研究的目的就是提高菌株的轉(zhuǎn)化產(chǎn)率和產(chǎn)量，為實現(xiàn)把生物技術(shù)用于磷霉素的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。 采用紫外(

2、UV)+亞硝基胍(NTG)復(fù)合誘變方法處理復(fù)壯后菌株F79，以含最低抑菌濃度(MIC)FOM的分離培養(yǎng)基作為抗性篩選的分離平板，挑選生長良好的菌落進(jìn)行初篩、復(fù)篩。得到一株高產(chǎn)、穩(wěn)定的FOM生產(chǎn)菌株FUNs，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?.8％時，F(xiàn)OM產(chǎn)量由1.06mg．mL-1提高至2.20mg/mL，轉(zhuǎn)化產(chǎn)率提高了13.04％。 對FUN5的種子培養(yǎng)工藝進(jìn)行了研究，確定當(dāng)Т=37℃，pH=7.0時菌體生長最佳。同時本文也獲得了該菌的生長曲線

3、。 對FUNs的發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘油3％，硫酸銨1％，酵母膏0.3％，0.5％NaCl，0.02％NaVO3，0.03％CoCl6.2H2O；最優(yōu)發(fā)酵條件為：接種量8％；初始pH值為7.5；培養(yǎng)溫度為34℃；底物濃度為0.8％；發(fā)酵周期為96h。 產(chǎn)物的抑制作用是影響FOM轉(zhuǎn)化合成的一個主要原因，本文利用低強(qiáng)度超聲波刺激來改變細(xì)胞膜通透性，增加代謝產(chǎn)物的排出速率。通過對一系列超聲參數(shù)的