靜電紡聚合物超細(xì)纖維作為基因控釋體系的研究.pdf

1、電紡纖維技術(shù)作為一種新型的材料加工方法，可以得到直徑在納米到微米級的超細(xì)纖維膜。纖維膜具有較高的孔隙率、極大的比表面積、良好的結(jié)構(gòu)仿生性，有利于細(xì)胞的粘附和藥物的攜載和釋放。 本論文旨在構(gòu)建一種新型攜載基因的聚合物超細(xì)纖維制劑，系統(tǒng)研究基因的攜載和釋放，電紡和釋放過程中基因的結(jié)構(gòu)完整性和轉(zhuǎn)染活性的保持等。 本文首先是模型基因的提取和純化。通過CaCl2法制備E.coli DH5a的感受細(xì)胞，將pECFP-N2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受細(xì)

2、胞，構(gòu)建了含pECFP-N2質(zhì)粒的E.coli DH5a轉(zhuǎn)化子。經(jīng)大量培養(yǎng)擴(kuò)增后，利用試劑盒提取純化pECFP-N2質(zhì)粒。經(jīng)過紫外光譜、凝膠電泳檢測，得到的質(zhì)粒與原質(zhì)粒結(jié)構(gòu)相符、純度較高。 采用乳液電紡的方法，成功地將質(zhì)粒DNA載到聚乳酸.聚乙二醇共聚物(PELA)中，得到DNA/PELA纖維。纖維形貌規(guī)整，直徑為450±140 nm，激光共聚焦掃描電鏡觀察表明熒光標(biāo)記質(zhì)粒包裹于纖維內(nèi)部，形成了明顯的核殼結(jié)構(gòu)。質(zhì)粒的實(shí)際包裹效率

3、達(dá)到了92.7％，從纖維中萃取的質(zhì)粒經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測表明結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明質(zhì)?；钚粤己?，表明電紡過程較好地保護(hù)了質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和活性。體外釋放顯示出一個(gè)緩慢、穩(wěn)定的釋放特性，在12 h僅釋放了29.1％，維持了將近35天的緩慢釋放，表明了核殼結(jié)構(gòu)的纖維在減少突釋、保持持續(xù)釋放等方面的作用。電泳檢測結(jié)果表明核殼纖維在釋放過程中保持了完整的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證明了保持了較好的轉(zhuǎn)染效率，這進(jìn)一步證明了核殼結(jié)構(gòu)纖維對質(zhì)粒的保護(hù)作用。

4、 在乳液電紡中，分別在油相和水相中引入聚乙烯亞胺(PEI)，制備了DNA/PELA-PEI和DNA-PEI/PELA核殼結(jié)構(gòu)纖維。體外釋放結(jié)果表明，DNA/PELA-PEI和DNA/PELA纖維的釋放行為相近，都能很好地控制DNA的釋放。但DNA-PEI/PELA除了早期的突釋外，DNA-PEI復(fù)合粒子難于釋放出來。在細(xì)胞的粘附和增殖試驗(yàn)中，DNA/PELA-PEI纖維中PEI的加入一定程度上改變了纖維的親水性，但是隨著其含量的增加