納他霉素產(chǎn)生菌產(chǎn)量差異菌株的分析.pdf

1、納他霉素(Natamycin)是一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，能有效抑制霉菌和酵母菌的生物活性，是一種重要的生物防腐劑和抗真菌藥物。
　　 本論文應(yīng)用基因組重排技術(shù)選育得到納他霉素高產(chǎn)突變株F2-2，其產(chǎn)量與出發(fā)菌株SG-2相比提高了101.5％。分別采用DNA隨機擴增多態(tài)性(RAPD)技術(shù)及蛋白質(zhì)雙向電泳聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)對上述菌株進行分析。
　　 首先，通過單因素和正交試驗相結(jié)合的方法，建立了適于該放線菌的RAPD擴增條件，即

2、在20μL體系中，模板DNA濃度60～150ng，Taq聚合酶為1.0～1.5U，引物濃度0.3～0.4mM，dNTPs濃度200～250μM，Mg2+濃度2.5～3.0mM。此條件下可擴增出條帶數(shù)目多且清晰穩(wěn)定的電泳圖譜。RAPD檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，重排后菌株F2-2出現(xiàn)了一條1500bp左右的特異性條帶，將其在大腸桿菌DH5α中克隆并測序，在GenBank上進行序列比對發(fā)現(xiàn)該片段上的部分序列(約230bp)與Streptomyces gr

3、iseus(灰色鏈霉菌)，Streptomyces avermitilis(阿維鏈霉菌)，Streptomyces coelicolor A3(2)(天藍色鏈霉菌)，Streptomyces lavendulae(淡紫灰鏈霉菌)中的MarR-family轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子同源性較高，分別為100％，91％，88％，89％。
　　 其次，通過蛋白質(zhì)雙向電泳聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)基因組重排前后產(chǎn)量差異菌株存在著蛋白表達差異，結(jié)合已知的納他霉素生