抗體選擇性吸附材料的合成及性能評價.pdf

1、抗體(antibody)既是提高人體免疫力的關鍵蛋白，也是導致自身免疫性疾病的重要致病因子，目前將選擇性純化抗體的層析技術用于血液凈化已成為治療自身免疫性疾病的重要手段。研究表明，以疏水性化合物為配基的層析材料對抗體有一定的選擇吸附能力。本文選用16種功能分子即正丁胺、哌啶、芐胺、酪胺、3-氯-4-羥基-苯乙酸、N,N-二甲基乙二胺、N,N-二甲基丙二胺、甲基哌嗪、苯三羧酸、4-(3-氨丙基)嗎啡啉、4-氨基苯磺酰胺、4-甲氨基吡啶、吲

2、哚乙酸、4-巰基-乙基-吡啶(4-MEP)、磺胺甲氧噠嗪、硫嗎啉為配基，運用三種不同的活化方法將其固定到交聯(lián)瓊脂糖凝膠表面合成吸附材料。評價它們在生理溶液條件下對IgG的動態(tài)結合容量以及吸附選擇性，探討了配基的化學結構及載體的活化密度等因素對吸附材料抗體吸附性能的影響。獲得了如下研究結果： (1)吸附材料的活化密度對其吸附IgG能力會產生較大的影響。實驗表明其對IgG的動態(tài)結合容量隨活化密度的增加而增加。通過對lgO分子三級結構

3、的分析，研究發(fā)現(xiàn)吸附材料在生理溶液條件下通過多點作用方式結合于IgG分子表面較平坦的疏水殘基相對集中的區(qū)域，產生穩(wěn)定的吸附作用，增加的配基能夠對吸附作用力的實際增加產生貢獻。 (2)在16種吸附材料中，純蛋白體系條件下有6種吸附材料對IgG具有較高的動態(tài)結合容量(Q>10 mg/mL gel)。其中吲哚乙酸吸附材料對IgG的動態(tài)結合容量最高，達到37.5 mg/l gel；其次為4-MEP吸附材料達到21.7 mg/ml gel

4、。所有的吸附材料均沒有表現(xiàn)出對HSA強烈的吸附作用。 (3)為了考察吸附材料對IgG的選擇吸附能力，選擇血漿中高豐度蛋白HSA為對照，在37℃、pH7.4，0.01 mol/L磷酸鹽的緩沖液(PBS)中，分別測定上述吸附材料對IgG和HSA的吸附常數(shù)(KalgG、KaHSA)，利用IgG和HSA的吸附常數(shù)之比(KalgG/kaHSA)判定其選擇性。結果表明有7種吸附材料：芐胺吸附材料、正丁胺吸附材料、酪胺吸附材料、硫嗎啉吸附材料

5、、3-氯-4-羥基-苯乙酸吸附材料、吲哚乙酸吸附材料、4-MEP吸附材料的KalgG/KaHSA>10，表明它們對抗體具有吸附選擇性。 (4)在以上研究基礎上，選取6種對IgG具有較高動態(tài)結合容量及吸附選擇性的吸附材料，研究其對人血漿這種復雜體系中抗體的吸附能力。結果表明在復雜體系中除了4-MEP吸附材料以外，其他吸附材料對抗體的吸附容量都有較大程度的下降，其中最為明顯的是吲哚乙酸吸附材料(從37.5 mg/ml gel下降為7