兩種小鼠恐懼記憶形成的差異與血皮質醇水平及海馬CA1區(qū)NMDA受體亞單位表達的關系.pdf

1、目的 通過建立小鼠恐懼記憶能力的實驗動物模型，探索恐懼記憶形成后海馬CA1區(qū)NMDA受體亞單位表達的變化，從而尋找其分子作用機制。 方法 選用昆明種(KM)和C57BL/6小鼠，將足底電擊刺激的訓練與聲音相結合，觀察同一品種小鼠用不同電擊強度以及不同品種小鼠用相同條件訓練時，恐懼性記憶建立的差異。以訓練后24 h測試時出現(xiàn)木僵反應(stupor response)，作為恐懼性記憶形成的表現(xiàn)。以Flou-3/AM作

2、為熒光探針，用同源共聚焦顯微鏡測定腦片和培養(yǎng)海馬神經(jīng)細胞內鈣離子濃度變化；取腦組織，冷凍切片，用免疫組化方法測定海馬CA1區(qū)NMDA受體亞單位及c-fos表達，高效液相色譜法測定血漿皮質酮水平，將以上結果與行為學結果進行相關性分析。 結果 將聲音分別結合0.4mA、0.6mA、0.9mA足底電擊，24 h后在KM小鼠引出的木僵反應時間分別為60.00±57.77s，110.00±129.61s，101.99±20.38s

3、，強度0.6mA組的合格率最高(30％)，組間比較無顯著性差異(P>0.05)。C57BL/6小鼠在聲音結合0.4mA電擊條件下，木僵反應時間為275.62±36.99s，顯著長于KM小鼠的時間 (P<0.01)，其合格率為100％，遠高于KM小鼠的7.69％(0.4mA)。KM小鼠對照組和訓練組血漿發(fā)質酮水平分別為(101.083±70.266)μg/L、(215.453±60.276)μg/L，兩者比較差異顯著(P<0.01)；訓練

4、組血漿皮質酮水平與訓練結果木僵反應時間(36.00±29.292)s之間無相關性(r=-0.273，P>0.05)。C57BL/6小鼠對照組和訓練組血漿皮質酮水平分別為(108.009±20.452)μg/L、(176.933±38.202)μg/L，兩者比較差異顯著(P<0.01)；訓練組血漿皮質酮水平與訓練結果木僵反應時間(257.50±36.450s)之間無相關性(r=-0.462，P>0.05)。兩種小鼠的對照組、訓練組比較，均

5、為P>0.05，差異無顯著性意義。 C57BL/6小鼠訓練組海馬組織CA1區(qū)神經(jīng)細胞c-fos表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，前者陽性細胞數(shù)平均值為185.18±31.131，后者為145.39±54.383；前者平均灰度值為12583.02±3543.554，后者為8436.851±3434.484，兩者比較差異有統(tǒng)計學顯著意義(P<0.01)。NR2B的檢測，陽性細胞數(shù)平均值訓練組為(287.75±19.992)、對

6、照組為(254.26±31.897)，兩者比較差異有統(tǒng)計學顯著意義(P<0.01)；前者平均灰度值為47703.90±11152.912，后者為39009.06±11586.680，兩者比較差異有統(tǒng)計學顯著意義(P<0.05)。 結論 ①C57BL/6小鼠在聲音70dB，0.4mA電刺激下，24h后恐懼木僵反應時間滿足實驗要求，成功率達95％以上；②血漿皮質酮水平與訓練成績無明顯相關性，但C67BL/6小鼠相關系數(shù)r為-