玉屏風(fēng)湯主要成分大鼠藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、中藥是依據(jù)中醫(yī)藥理論,在長(zhǎng)期的臨床治療經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上總結(jié)出來的有效方劑,多以復(fù)方給藥治療疾病,是典型的復(fù)雜系統(tǒng)。目前記載的中藥種類已達(dá)12807種,我國醫(yī)學(xué)的偉大寶藏,但迄今為止,中藥還沒有真正進(jìn)入國際醫(yī)藥主流市場(chǎng)。究其原因,中藥經(jīng)驗(yàn)的東西多,真正的有效成分或有效部位還沒有完全搞清楚,質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)制定困難,藥效學(xué)和安全評(píng)價(jià)及臨床研究比較滯后。在現(xiàn)代醫(yī)藥迅猛發(fā)展的今天,中藥要想全面進(jìn)入國際市場(chǎng),首先必須弄清楚中藥化學(xué)成分與藥效作用機(jī)理之間的關(guān)系

2、,這就要深入研究中藥在體內(nèi)的變化過程,即進(jìn)行中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究,了解中藥有效成分在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄及藥理、毒理性質(zhì)[1]。
　　玉屏風(fēng)源于元代《丹溪心法》,由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)3味藥組成。方中黃芪為君藥,白術(shù)為臣藥,防風(fēng)為佐藥,組方比3:1:1,是中醫(yī)扶正固本的經(jīng)典方劑[2],臨床主要用于反復(fù)發(fā)作的呼吸道感染、支氣管哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病[3]。本研究以玉屏風(fēng)湯為工具藥,依據(jù)已報(bào)道的藥效學(xué)研究結(jié)果和中國藥典,在中醫(yī)藥理論的指

3、導(dǎo)下,選取3味藥的主要活性成分:黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷[4-7]作為研究對(duì)象,開展玉屏風(fēng)的質(zhì)量控制新方法的探討和主要活性成分藥物動(dòng)力學(xué)研究,旨在得出君藥黃芪甲苷在不同組別中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù),從藥動(dòng)學(xué)角度探討玉屏風(fēng)組方的配伍機(jī)制。本研究的具體內(nèi)容包括以下兩個(gè)部分:
　　第一部分玉屏風(fēng)湯中黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷含量的測(cè)定
　　本研究建立了同時(shí)測(cè)定玉屏風(fēng)湯中黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷含量的方法。方法建立的過程中,比

4、較了不同比例的甲醇-水、乙腈-水流動(dòng)相體系,選定色譜條件;采用儀器tuning文件優(yōu)化的條件,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行Scan、陽離子和陰離子監(jiān)測(cè)掃描,參考已發(fā)表的研究報(bào)告,選定質(zhì)譜條件。最終優(yōu)化確定的色譜質(zhì)譜條件為:HederaODS-2(2.0mm×150mm,5mm)色譜柱,流動(dòng)相為甲醇:水(68:32,v:v),流速:0.2mL/min;電噴霧電離(ESI+),選擇性離子監(jiān)測(cè)(SIM)質(zhì)荷比807.50[8],287.05,469.05的離

5、子對(duì),內(nèi)標(biāo)為替米沙坦。方法學(xué)考察實(shí)驗(yàn)得出黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷的精密度RSD均小于5％,黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷含量的加樣回收率分別為95.47%、101.94%和103.70。該方法方便、快捷、穩(wěn)定,可同時(shí)測(cè)定湯中3味藥主成分的含量,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本實(shí)驗(yàn)定量了湯中的3味藥的主成分,為玉屏風(fēng)主成分體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究提供了理論基礎(chǔ)。
　　第二部分HPLC-MS法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中的黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ濃度及藥動(dòng)學(xué)研究

6、r>　　本研究建立了同時(shí)測(cè)定大鼠血清中黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ含量的方法。方法建立的過程中參照已建立的同時(shí)測(cè)定玉屏風(fēng)湯中黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ含量的方法條件,對(duì)質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化;考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水流動(dòng)相體系和梯度洗脫,選定色譜條件;考察了不同比例乙醚、乙酸乙酯的液液萃取方法,不同洗脫劑組成的固相萃取方法,甲醇、乙腈沉淀蛋白法,同時(shí)考察了內(nèi)標(biāo)地西泮和替米沙坦,最終選定內(nèi)標(biāo)和血漿樣品前處理方法。最終優(yōu)化確定的色譜質(zhì)譜條件為:

7、HederaODS-2(2.0mm×150mm,5mm)色譜柱,流動(dòng)相體系為流動(dòng)相A:0.01%乙酸水溶液和流動(dòng)相B:甲醇,采用梯度洗脫,流速:0.2mL/min;電噴霧電離(ESI+),選擇性離子監(jiān)測(cè)(SIM)質(zhì)荷比為807.35,287.05的離子對(duì),內(nèi)標(biāo)為地西泮。通過方法學(xué)實(shí)驗(yàn)得出日內(nèi)、日間精密度RSD均小于15%,黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ回收率穩(wěn)定且大于70%。該方法方便、快捷、穩(wěn)定,可同時(shí)測(cè)定大鼠血清中黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ的含

8、量,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　　“君臣佐使”是方劑的組方原則。君藥在中醫(yī)藥理論中被認(rèn)為是治療疾病的主要成分。因此,在開展藥動(dòng)學(xué)研究時(shí),重點(diǎn)關(guān)注君藥活性成分的藥動(dòng)學(xué)特征及變化。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為3組:第一組:君藥(黃芪甲苷),第二組:君藥+臣藥(黃芪甲苷+白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ),第三組:君藥+臣藥+佐藥(黃芪甲苷+白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ+升麻苷)。給藥劑量的確定來自于已報(bào)道的黃芪甲苷單體(20mg/kg)藥動(dòng)學(xué)給藥劑量,根據(jù)黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷在湯中的含

9、量比例得出白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ(2.16495mg/kg)和升麻苷(569.9mg/kg)的給藥劑量。但由此得出的升麻苷給藥劑量過大,最終選擇升麻苷LD50(116.9mg/kg)作為給藥劑量。將各單體配成CMC-Na混懸液灌胃給藥,開展藥動(dòng)學(xué)研究。采用WinNonlin軟件,非房室模型擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果如下:黃芪甲苷組(Tmax:2.1±0.55,Cmax:34±7.58,AUC0-24:263.14±100.59,MRT:6.38±1.5