惡性腫瘤細(xì)胞系自發(fā)性及血清剝奪誘導(dǎo)老化的研究.pdf

1、【研究背景】：
　　絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進(jìn)入衰老(senescence)狀態(tài)。此時(shí)細(xì)胞仍然是存活的，但是細(xì)胞基因和蛋白的表達(dá)均發(fā)生了很大變化。細(xì)胞衰老又稱(chēng)老化，既不同于損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞休眠，也不同于細(xì)胞生長(zhǎng)接觸抑制所表現(xiàn)的細(xì)胞周期停滯，是一種緩慢的、由一系列基因操控的細(xì)胞死亡過(guò)程，且老化的細(xì)胞不能用常規(guī)的刺激再次誘導(dǎo)其分裂。老化的細(xì)胞通常表現(xiàn)為體積增大，pH6.0時(shí)表達(dá)高酶活性的β-半乳糖苷酶。細(xì)

2、胞衰老不同于凋亡，主要是以不可逆的細(xì)胞周期抑制為特點(diǎn)，被認(rèn)為是生物體重要的腫瘤預(yù)防機(jī)制，同時(shí)也是生物體老化(aging)的一種原因。
　　在細(xì)胞生長(zhǎng)的周期中，細(xì)胞會(huì)經(jīng)歷多種形式的生物、化學(xué)及物理應(yīng)激，導(dǎo)致細(xì)胞死亡或致癌性轉(zhuǎn)化。同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)存在不同的損傷修復(fù)機(jī)制來(lái)應(yīng)對(duì)這些損傷因素，其中主要包括凋亡和衰老。細(xì)胞老化可由多種內(nèi)外源性刺激引發(fā)，包括端粒的功能障礙，癌基因的激活以及抑癌基因的失活等，但其主導(dǎo)機(jī)制仍然不十分清楚。
　　細(xì)

3、胞老化作為一種不可逆的生長(zhǎng)抑制現(xiàn)象,能夠防止腫瘤細(xì)胞或非正常細(xì)胞的進(jìn)一步生長(zhǎng)，對(duì)抗永生化細(xì)胞的無(wú)限增殖能力而對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用。對(duì)細(xì)胞老化的信號(hào)傳導(dǎo)通路及其調(diào)節(jié)因子等方面的深入研究可能為腫瘤等重大疾病的預(yù)防和治療提供幫助。
　　【目的】：
　　1.探討惡性腫瘤細(xì)胞系是否普遍存在自發(fā)性老化現(xiàn)象；
　　2.研究惡性腫瘤細(xì)胞系老化現(xiàn)象的分子機(jī)制。
　　【方法】：
　　1.隨機(jī)選取10種惡性腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)；

4、
　　2.應(yīng)用老化相關(guān)半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色檢測(cè)10種惡性腫瘤細(xì)胞系中SA-β-gal的表達(dá)情況；
　　3.檢測(cè)血清剝奪24h后10種惡性腫瘤細(xì)胞系中SA-β-gal的表達(dá)情況；
　　4.應(yīng)用免疫熒光染色法分析惡性腫瘤細(xì)胞系中PTEN基因的表達(dá)以及血清剝奪前后該基因的表達(dá)變化；
　　5.應(yīng)用miRNA芯片檢測(cè)血清剝奪24h前后miRNAs的變化，篩選老化相關(guān)的miRNAs。
　　【結(jié)果】：

5、>　　1.在未經(jīng)誘導(dǎo)處理且處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的10種惡性腫瘤細(xì)胞系中，均發(fā)現(xiàn)有SA-β-gal陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞。但不同細(xì)胞系中，SA-β-gal陽(yáng)性的老化細(xì)胞所占比例明顯不同，最高為HepG2細(xì)胞系（3.69％），最低為HeLa細(xì)胞系（0.65％）(F=13.006,P=0.000)；
　　2.SA-β-gal陽(yáng)性的老化細(xì)胞不都是多倍體細(xì)胞；
　　3.給予無(wú)血清培養(yǎng)液饑餓24h后，老化細(xì)胞數(shù)目明顯增加(P=0.001)；
　

6、　4.PTEN的表達(dá)模式與SA-β-gal的一種表達(dá)模式相似，可僅出現(xiàn)在個(gè)別體積較大的細(xì)胞中，并且血清剝奪后其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增加；
　　5.血清剝奪24h后，多種miRNAs的表達(dá)發(fā)生了改變，其中hsa-miR-320的表達(dá)在H929和MCF7兩種惡性腫瘤細(xì)胞系中均明顯上調(diào)。
　　【結(jié)論】：
　　1.惡性腫瘤細(xì)胞系普遍存在自發(fā)性老化現(xiàn)象，但其水平明顯不同(F=13.006,P=0.000)；
　　2.老化細(xì)胞并