納米級鈦合金和氧化鋯磨損微粒對腎臟毒性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：比較納米級鈦合金(Ti-6Al-4V)與氧化鋯（ZrO2）磨損微粒誘導(dǎo)大鼠腎毒性以及人腎近曲小管上皮細(xì)胞（HK-2細(xì)胞）的損傷程度，并從氧化應(yīng)激方面探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：動物水平:用不同濃度的納米級Ti-6Al-4V和ZrO2磨損微粒連續(xù)腹腔注射處理大鼠7天以研究其對大鼠腎的毒性作用;觀察腎組織病理學(xué)變化，分析腎功能生化指標(biāo)和腎組織氧化應(yīng)激指標(biāo)(SOD、MDA、GSH-Px);進(jìn)一步以免疫組化法觀察NF-κB激活

2、-轉(zhuǎn)運(yùn)活性，并通過RT-PCR法檢測組織抗氧化酶(SOD、GSH-Px、Trx)的表達(dá)。細(xì)胞水平:以不同濃度的Ti-6Al-4V和ZrO2磨損微粒與HK-2細(xì)胞共培養(yǎng)不同時(shí)間研究其對細(xì)胞的毒性作用。CCK-8法檢測細(xì)胞增殖;結(jié)合熒光顯微鏡，采用AO/EB法檢測細(xì)胞凋亡及壞死率、熒光染料DCFH-DA檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)、細(xì)胞免疫熒光染色檢測NF-κB激活-轉(zhuǎn)運(yùn)活性;進(jìn)一步通過Western Blot檢測微粒負(fù)荷下細(xì)胞凋亡蛋白酶(P

3、ARP、Caspase9及Caspase3)的表達(dá)，RT-PCR檢測組織抗氧化酶的表達(dá)
　　結(jié)果：1、組織學(xué)檢測:兩種磨損微粒組大鼠腎切片均有不同程度的腎小管管型存在，其病理改變與微粒濃度呈依賴性。2、氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測:動物模型顯示兩種磨損微粒均呈濃度依賴性降低抗氧化酶SOD、GSH-Px含量，增加氧化產(chǎn)物MDA生成。而細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示GSH-Px活性隨濃度增加存在增加趨勢，但在峰值后隨濃度增加而下降。微粒處理組抗氧化酶mRNA表達(dá)在

4、兩個(gè)層面亦存在相似改變。3、凋亡檢測:Ti-6Al-4V組較ZrO2組具有更高的凋亡率，且存在濃度依賴性。且兩組凋亡蛋白的表達(dá)均高于對照組。4、NF-κB活化:動物、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)均提示微粒處理組的NF-κB激活轉(zhuǎn)運(yùn)明顯高于對照組，且具有濃度依賴性，細(xì)胞試驗(yàn)中PDTC預(yù)處理組可顯著抑制微粒誘導(dǎo)的NF-κB活化及細(xì)胞內(nèi)ROS水平。
　　結(jié)論：1、Ti-6Al-4V和ZrO2微粒均能誘導(dǎo)大鼠腎功能及HK-2細(xì)胞損傷，且具有濃度效應(yīng)關(guān)系，相同