酶育牛黃與天然牛黃化學(xué)成分的比較研究.pdf

1、牛黃為牛的膽結(jié)石,是一種療效確實(shí)的名貴中藥材。主要化學(xué)成分有膽酸、去氧膽酸、鵝去氧膽酸、膽紅素等。具有清熱、豁痰、開(kāi)竅、涼肝、息風(fēng)、解毒功效。酶育牛黃是以新鮮牛膽汁為原料根據(jù)天然牛黃形成原理,采用酶法制備的牛黃。
　　 本項(xiàng)目建立了酶育牛黃與天然牛黃的指紋圖譜研究方法；對(duì)酶育牛黃和天然牛黃中的膽汁酸、膽紅素、膽固醇、微量元素等成分進(jìn)行了系統(tǒng)比較研究。通過(guò)系統(tǒng)研究,對(duì)酶育牛黃與天然牛黃的一致性進(jìn)行評(píng)價(jià),為酶育牛黃的新藥開(kāi)發(fā)和產(chǎn)品質(zhì)

2、量控制標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和技術(shù)資料。課題研究主要內(nèi)容及結(jié)果如下:一、酶育牛黃與天然牛黃中二甲基亞砜提取成分的定性與定量比較研究
　　 建立了酶育牛黃與天然牛黃HPLC指紋圖譜,比較了兩種牛黃該類成分指紋圖譜的異同。10批酶育牛黃的HPLC指紋圖譜相似度較高,提示酶育牛黃的生產(chǎn)制備工藝較穩(wěn)定。但在天然牛黃的10個(gè)共有色譜峰中,酶育牛黃中可以檢測(cè)到5個(gè)色譜峰,其中多數(shù)色譜峰的信號(hào)強(qiáng)度低于天然牛黃,主要成分膽紅素含量酶育牛黃較天然牛黃低

3、,但酶育牛黃中也有一成分比天然牛黃高,表明酶育牛黃與天然牛黃二甲基亞砜提取成分的種類及含量存在一定差異。
　　 建立了膽紅素的HPLC含量測(cè)定方法,采用C18色譜柱,甲醇-氯仿-1％醋酸(65:32:3)流動(dòng)相系統(tǒng),檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm,流速1.0 mL·min-1。酶育牛黃與天然牛黃中的含量分別為9.35μg·mg-1、45.32μg·mg-1,兩種牛黃中膽紅素的含量差異明顯。
　　 二、酶育牛黃與天然牛黃中膽汁酸類成

4、分的定性與定量比較研究
　　 建立了酶育牛黃與天然牛黃HPLC-ELSD指紋圖譜。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的操作規(guī)范(版本2004A)軟件分別對(duì)10批酶育牛黃與天然牛黃色譜圖進(jìn)行分析,建立了天然牛黃色譜指紋圖譜共有模式,并與10批酶育牛黃的指紋圖譜進(jìn)行了比較。10批酶育牛黃藥材指紋圖譜的相似度分別為0.980、0.991、0.979、0.990、0.984、0.992、0.983、0.989、0.991和0.983,表

5、明不同批次酶育牛黃的相似度較高,說(shuō)明酶育牛黃生產(chǎn)制備工藝穩(wěn)定。10批酶育牛黃與天然牛黃共有模式色譜圖比較相似度較低,天然牛黃中膽酸類成分有8個(gè)共有色譜峰,酶育牛黃也檢出8個(gè)色譜峰,其中1、2、4、5、6色譜峰與天然牛黃膽酸類成分的共有色譜峰相同,但4、5號(hào)色譜峰的信號(hào)強(qiáng)度較弱；在酶育牛黃中未檢測(cè)到第3、7、8號(hào)色譜峰,但檢測(cè)到天然牛黃中未檢出的第9、10、11號(hào)色譜峰,表明酶育牛黃與天然牛黃的膽酸類成分存在一定差異。
　　 建立

6、了6種膽酸的HPLC-ELSD含量測(cè)定方法,并對(duì)兩種牛黃中的膽酸含量進(jìn)行了比較。采用C18色譜柱,ELSD檢測(cè)器,甲醇和0.1％的醋酸水溶液梯度洗脫流動(dòng)相系統(tǒng)。兩種牛黃各自3個(gè)批次之間的膽酸類成分及其含量一致,但兩種牛黃之間的膽酸類成分及含量存在差異。天然牛黃中檢測(cè)到膽酸、鵝去氧膽酸和去氧膽酸3種膽酸類成分；酶育牛黃中檢測(cè)到膽酸、鵝去氧膽酸和豬去氧膽酸3種膽酸類成分,即兩種牛黃均含有膽酸、鵝去氧膽酸二種共有成分,并各含有一種不同的膽酸類

7、成分,其各種膽酸類成分含量存在差異。
　　 三、酶育牛黃與天然牛黃中微量元素的比較研究
　　 采用火焰原子吸收光譜法和石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定了牛黃中12種元素。酶育牛黃中的Cu、Zn、Fe、Mn、Ca、Mg、K、Na等8種元素與天然牛黃中的含量無(wú)明顯差異,Pb、Cr、Ni、Cd等重金屬含量與天然牛黃相比差異較小。通過(guò)對(duì)酶育牛黃與天然牛黃中微量元素的比較研究,為評(píng)價(jià)和開(kāi)發(fā)利用酶育牛黃提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 四、酶

8、育牛黃與天然牛黃中膽固醇的定量比較研究
　　 建立了膽固醇的HPLC-ELSD測(cè)定法,采用C18色譜柱,ELSD檢測(cè)器,以乙腈和異丙醇(1:1)為流動(dòng)相,測(cè)定了兩種牛黃中膽固醇的含量,三批天然牛黃中的含量分別為6.53μg·mg-1、5.69μg·mg-1、5.12μg·mg-1,三批酶育牛黃中的含量分別為2.78μg·mg-、2.34μg·mg-1、2.13μg·mg-1,天然牛黃中膽固醇含量高,提示可能與天然牛黃體內(nèi)成石機(jī)理