降血尿酸乳酸菌篩選及乳桿菌對(duì)高血尿酸血癥大鼠作用的研究.pdf

1、目的:
　　 1.從55株來自大連醫(yī)科大學(xué)微生態(tài)學(xué)教研室菌種保藏庫的乳酸菌中篩選出對(duì)核苷具有較快分解速率的菌株，通過生物學(xué)特性評(píng)價(jià)，選擇DM9218作為最優(yōu)菌株。
　　 2.觀察DM9218對(duì)高尿酸血癥模型大鼠的干預(yù)效果。
　　 3.對(duì)DM9218進(jìn)行初步安全性評(píng)價(jià)。
　　 方法:
　　 1.高效降解核苷乳酸菌株的篩選，生物學(xué)特性評(píng)價(jià)
　　 基于RP-HPLC方法，通過檢測含有肌苷、鳥苷的

2、反應(yīng)液在接種乳酸菌并培養(yǎng)60min后，反應(yīng)液中肌苷與鳥苷含量變化，篩選出若干株對(duì)核苷具有最快分解速率的菌株做為候選菌株。
　　 候選菌株生物學(xué)特性評(píng)價(jià)包括耐酸、耐膽鹽試驗(yàn)，候選菌株的膽鹽耐受馴化實(shí)驗(yàn)，耐消化道酶類（胃蛋白酶、胰蛋白酶）實(shí)驗(yàn)，抑菌實(shí)驗(yàn)，抗生素敏感實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)H2O2能力實(shí)驗(yàn)及HT-29細(xì)胞粘附性實(shí)驗(yàn)等部分，根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定最優(yōu)目的菌株。
　　 2.最優(yōu)目的菌株對(duì)高尿酸血癥模型大鼠的干預(yù)效果研究
　　

3、 將清潔級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分五組:正常對(duì)照組，高尿酸血癥模型組，乳酸菌低劑量組，乳酸菌高劑量組，別嘌呤醇干預(yù)組。在造高尿酸血癥模型的同時(shí)對(duì)大鼠進(jìn)行乳酸菌菌懸液灌胃，于實(shí)驗(yàn)第0、7、14d采血，測定血漿中尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。
　　 3.最優(yōu)目的菌株初步安全性評(píng)價(jià)
　　 最優(yōu)目的菌株初步安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)包括以下三個(gè)部分:急毒實(shí)驗(yàn)，質(zhì)粒檢測及細(xì)菌易位判斷。
　　 4.對(duì)最優(yōu)目的菌株進(jìn)行

4、菌種鑒定
　　 對(duì)最優(yōu)目的菌株進(jìn)行16SrDNA測序，結(jié)合生化鑒定確定其種屬性。
　　 結(jié)果:
　　 1.自55株供試乳酸菌株中篩選出4株具有較高核苷分解速率的菌株:DM9218、DM9242、DM9505、DM9514。
　　 對(duì)這四株候選菌株進(jìn)行的生物學(xué)特性評(píng)價(jià)結(jié)果表明，DM9218擁有最大的核苷分解速率，經(jīng)馴化后可耐受胃腸道環(huán)境，具有一定的抑菌能力，對(duì)多種抗生素敏感，細(xì)胞粘附性良好;因此選擇DM92

5、18做為最優(yōu)菌株，進(jìn)行后繼實(shí)驗(yàn)研究。
　　 2.菌株DM9218對(duì)高尿酸血癥模型大鼠的干預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DM9218低劑量的血尿酸含量明顯低于高尿酸血癥模型組(P＜0.05)，明顯高于別嘌呤醇干預(yù)組(P＜0.05)，DM9218高劑量組的血尿酸含量明顯低于高尿酸血癥模型組(P＜0.05)，明顯低于DM9218低劑量組(P＜0.05)，明顯高于別嘌呤醇干預(yù)組(P＜0.05);各組血尿素氮含量差異不顯著(P＞0.05);各組血肌酐含

6、量差異不顯著(P＞0.05)。
　　 3.菌株DM9218不含有質(zhì)粒，在正常情況下不會(huì)發(fā)生細(xì)菌易位，菌株DM9218無急毒性。
　　 4.經(jīng)16SrDNA測序結(jié)合生化鑒定結(jié)果表明，DM9218為植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。
　　 結(jié)論:
　　 通過對(duì)55株供試乳酸菌的定向篩選，篩選出一株菌DM9218，它具有最高的體外降解核苷能力，不含有質(zhì)粒，正常情況下不會(huì)發(fā)生細(xì)菌易位，不