磁性免疫層析定量技術檢測癌胚抗原的應用研究.pdf

1、背景:
　　近年來，全球癌癥發(fā)病率和死亡率不斷上升，癌癥已成為人類死亡的首要原因。隨著醫(yī)學科學技術的快速發(fā)展，其診療水平顯著提高，但仍不能滿足人類和臨床的需要。許多研究表明，腫瘤標記物在腫瘤的早期發(fā)現、早期診斷、臨床分期、評價療效和預后等方面具有重要意義。早期、便捷、快速、準確的檢測人血液中腫瘤標記物的含量，便于及時發(fā)現腫瘤患者和對其進行適當的干預，有利于改善預后。目前腫瘤標記物的臨床檢測大多依靠中心實驗室，需要專業(yè)人員操作和大型

2、儀器，樣本周轉時間較長而且費用偏高，不利于腫瘤標記物的時實監(jiān)測。
　　上世紀末逐步發(fā)展起來的側流免疫層析試紙條是一種具有準確、快速、便捷、經濟等優(yōu)勢的新型快速免疫檢測技術，可以在床邊或者采樣現場進行檢測，已被廣泛應用于臨床診斷、療效監(jiān)測等領域中生物標記物的檢測。然而基于膠體金等標記物的光學免疫層析檢測技術只能定性或者半定量檢測，而且檢測的靈敏度和一致性較低。近年來，基于磁性納米材料的磁信號檢測成為免疫層析定量檢測技術的研究熱點。<

3、br>　　目的:
　　建立以超順磁性納米微球為標記物的磁性側流免疫層析試紙條檢測體系，可用于早期、快速、準確、便捷的檢測腫瘤標記物癌胚抗原。
　　方法:
　　1.采用EDC/NHS活化法在羧基官能團修飾的磁性納米微球表面偶聯抗體制備免疫磁珠并通過掃描電子顯微鏡、紅外光譜檢測儀及BCA蛋白定量檢測試劑盒進行表征。
　　2.優(yōu)化免疫磁珠的制備體系和磁性免疫層析試紙條的各個組成部分，構建用于檢測腫瘤標記物CEA的磁性免

4、疫層析試紙條，并對其性能進行測定。
　　3.用創(chuàng)建的本檢測體系和臨床常用的電化學發(fā)光法檢測120例臨床血清樣本，對其檢測結果進行比較分析，進一步驗證該檢測體系的應用價值。
　　4.對臨床樣本檢測結果使用SPSS17.0統計學軟件進行處理，運用t檢驗、相關性分析和x2檢驗分析該檢測體系的精確性。取檢驗水準α=0.05。
　　結果:
　　1.采用EDC/NHS活化法制備的免疫磁性納米微球粒徑均一、分散性良好，性能穩(wěn)定

5、，適于免疫層析系統的構建。
　　2.構建該磁性側流免疫層析試紙條的最適磁性微球粒徑為100nm，免疫磁性納米微球制備過程中每毫克磁珠最佳抗體加入量為40μg，最佳的NC膜型號為Sartourius CN140，整個檢測過程可在15分鐘內完成。
　　3.該檢測體系定性檢測CEA標準樣品的濃度范圍為10ng/ml～1000ng/ml，定量檢測的范圍為0.1ng/ml～1000ng/ml，并且特異性高，穩(wěn)定性和重復性均良好。

6、>　　4.該試紙條與臨床電化學發(fā)光法檢測臨床血液樣本的檢測結果相關性良好(P＜0.05)，本檢測方法批間重復性可(P＞0.05)，具有較高的精密度和穩(wěn)定性。
　　結論:
　　本研究以超順磁性納米微球為標記物，研制了CEA磁性側流免疫層析檢測試紙條，通過利用磁信號檢測儀(MAR)能夠對血清腫瘤標記物CEA進行定量和可視化檢測，實現了對血液腫瘤標記物快速、簡便、準確檢測的目標，并且降低了檢測成本和提高了工作效率，具有廣泛的應用前