Capsazepine抑制中樞甘氨酸受體及其機(jī)制研究.pdf

1、興奮性和抑制性的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的正常功能。甘氨酸受體(GlyRs)與抑制性遞質(zhì)甘氨酸結(jié)合后開放氯離子通道介導(dǎo)抑制性突觸傳遞，在成年哺乳動(dòng)物CNS中起抑制性效應(yīng)。甘氨酸受體通過先天突變或RNA編輯或磷酸化修飾，產(chǎn)生功能紊亂和障礙，機(jī)體發(fā)生病理變化。以甘氨酸受體為靶點(diǎn)的藥物研究使我們能夠深入認(rèn)識(shí)其在體內(nèi)的生理功能，為尋找開發(fā)新的藥物并應(yīng)用于臨床治療提供線索與依據(jù)。
　　Capsazepine(CPZ)是TRPV1的

2、拮抗劑。我們發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)的海馬和脊髓神經(jīng)元中，CPZ可以抑制甘氨酸誘發(fā)的電流。姜黃素，TRPV1的另一種拮抗劑則對(duì)甘氨酸受體沒有抑制效應(yīng);而在TRPV1敲除小鼠，CPZ對(duì)甘氨酸受體具有與野生型動(dòng)物同樣的抑制效應(yīng)。以上證據(jù)說明CPZ特異性地抑制GlyRs，并且不依賴于TRPV1的作用。CPZ有效地抑制了飽和濃度的甘氨酸反應(yīng)，沒有改變甘氨酸激活GlyRs的EC50和Hill常數(shù)，表現(xiàn)為非競(jìng)爭(zhēng)性地抑制。在HEK293細(xì)胞系異源表達(dá)甘氨酸受體的

3、不同亞基組成的異構(gòu)體，CPZ對(duì)各種甘氨酸受體的異構(gòu)體均有抑制效應(yīng)。
　　免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CPZ處理后神經(jīng)元膜表面GlyRs斑點(diǎn)數(shù)量和熒光強(qiáng)度沒有明顯變化;生物素方法檢測(cè)膜蛋白和總蛋白中GlyRs的含量，免疫印跡結(jié)果顯示CPZ作用后神經(jīng)元膜表面的GlyR表達(dá)量沒有明顯變化。因此，CPZ不是通過調(diào)控甘氨酸受體膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制減少甘氨酸激發(fā)的電流。
　　在單通道水平觀察甘氨酸受體的門控，膜貼附式（cell-attached）記錄

4、表明CPZ降低了甘氨酸受體的開放概率，對(duì)氯離子電導(dǎo)沒有明顯影響。在膜外面向外(outside-out)記錄模式下，CPZ對(duì)甘氨酸受體單通道活動(dòng)沒有明顯影響，提示CPZ不與甘氨酸受體直接結(jié)合，可能是通過細(xì)胞內(nèi)機(jī)制對(duì)甘氨酸受體發(fā)揮抑制效應(yīng)。
　　總之，以上的研究結(jié)果表明CPZ可能通過細(xì)胞內(nèi)機(jī)制抑制甘氨酸受體介導(dǎo)的電流，并且此效應(yīng)不依賴TRPV1的作用。本課題為認(rèn)識(shí)CPZ在CNS中的作用提供新的見解，為其作為TRPV1拮抗劑在實(shí)驗(yàn)科學(xué)中