脂肪與骨髓來源的成骨細(xì)胞成骨活性對比研究.pdf

1、組織和器官的喪失或功能障礙是人類健康所面臨的主要危害之一，在骨科方面，骨折不連及骨缺損是臨床的常見疾病，每年消耗掉大量的醫(yī)療資源，也為眾多患者帶來極大的痛苦．骨缺損目前的常用治療方法是采用自體骨移植、異體骨移植或植入人工骨來治療。無論是自體骨、異體骨還是人工骨都屬于“死骨”，最終都要通過機(jī)體自身的成骨細(xì)胞“爬行替代”來轉(zhuǎn)化為新生骨，這一過程相當(dāng)漫長，若骨缺損較大，則難以完全“爬行替代”成功。自體骨移植的組織來源也有限，取材會對患者造成一

2、定的痛苦，有一定的重吸收率，影響移植的成功率；異體骨組織移植后可促進(jìn)自體骨的再生，機(jī)制可能是異體骨中含有骨形成蛋白的促生長作用，但這種促生長作用不穩(wěn)定，促進(jìn)骨愈合的作用不明顯，而且還有從供體到受體傳播疾病的危險；人工材料吸收慢，常常在移植物的周圍形成結(jié)締組織囊，影響移植物的穩(wěn)定性。組織工程學(xué)再造組織的出現(xiàn)為骨修復(fù)提供了新的方法，種子細(xì)胞的來源是組織工程學(xué)最基本、最重要的環(huán)節(jié)。經(jīng)骨穿刺可獲得骨髓基質(zhì)細(xì)胞，獲得量相對充足，取材比較方便、培養(yǎng)

3、方法較成熟、成骨能力確切，從而使骨髓基質(zhì)細(xì)胞備受關(guān)注。一直以來，骨髓基質(zhì)細(xì)胞被認(rèn)為是最有可能進(jìn)入臨床應(yīng)用的種子細(xì)胞。隨著脂肪組織中基質(zhì)細(xì)胞干細(xì)胞功能的發(fā)現(xiàn)，因其具有向多種細(xì)胞分化的能力而成為近年來組織工程研究的熱點。人體脂肪組織含量豐富，脂肪基質(zhì)細(xì)胞取材容易，且細(xì)胞培養(yǎng)、擴(kuò)增較容易，并已明確能誘導(dǎo)成為成骨細(xì)胞，有望取代骨髓基質(zhì)細(xì)胞成為更佳的種子細(xì)胞。 目的：對脂肪基質(zhì)細(xì)胞與骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性加以研究并比較二者的成骨

4、活性，從一個方面來評價脂肪基質(zhì)細(xì)胞能否取代骨髓基質(zhì)細(xì)胞。 方法：手術(shù)中收集同一人體的脂肪組織與骨髓組織。脂肪組織經(jīng)機(jī)械切割后以Ⅰ型膠原酶消化獲得脂肪基質(zhì)細(xì)胞，骨髓組織以淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法分離骨髓基質(zhì)細(xì)胞；二者均以含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液體外培養(yǎng)、傳代后以誘導(dǎo)培養(yǎng)液(培養(yǎng)液中加入終濃度為10mmol/1β-甘油磷酸鈉、10<'-8>mol/l地塞米松、50mg/l維生素C)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)。誘導(dǎo)后第2周及第

5、3周各檢測一次細(xì)胞中的堿性磷酸酶的含量，做為成骨活性的對比指標(biāo)，并行Von Kossa鈣結(jié)節(jié)染色進(jìn)一步鑒定成骨細(xì)胞． 結(jié)果：共獲得15例患者的脂肪與骨髓組織，其中10例完成實驗．脂肪基質(zhì)細(xì)胞與骨髓基質(zhì)細(xì)胞相比，更容易培養(yǎng)成活，擴(kuò)增速度快；細(xì)胞形態(tài)相似，所有經(jīng)過誘導(dǎo)的細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)中均有或多或少的黑色的鈣結(jié)節(jié)形成；堿性磷酸酶定量值經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析無顯著差異，提示二者的成骨活性相近。 結(jié)論：組織工程的出現(xiàn)為解決骨不連和骨缺損問