半夏的品質(zhì)及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：進(jìn)行半夏的品質(zhì)和抗腫瘤活性研究。 方法：在半夏品質(zhì)研究方面，采用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定半夏中琥珀酸的含量，采用高效毛細(xì)管電泳(HPCE)測(cè)定半夏苯甲酸的含量，采用紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)總含量。采用等電聚焦(IEF)和SDS變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離半夏中蛋白質(zhì)，采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA技術(shù)(RAPD)進(jìn)行半夏DNA分子鑒別和遺傳多樣性研究，在半夏抗腫瘤活性方面，采用MTT法測(cè)定半夏不同提取物及半夏

2、蛋白對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞系Bel-7402細(xì)胞和HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，并采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定其對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：建立了用HPLC法進(jìn)行半夏等藥材的琥珀酸含量測(cè)定方法，利用該方法測(cè)定樣品，所選擇的包譜條件對(duì)琥珀酸的分離較好，其它組分不干擾琥珀酸的測(cè)定，色譜峰圖形對(duì)稱，基線平直。穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、精密度均較好。但不同產(chǎn)地的半夏以及同一產(chǎn)地的不同采收期以及同一采收期的大粒與小粒的含量有較大的差異性。不同地區(qū)半夏樣品的琥珀

3、酸含量差別較大。建立了應(yīng)用HPCE方法進(jìn)行半夏藥材的苯甲酸含量測(cè)定方法。由于苯甲酸紫外吸收強(qiáng)，該方法樣品和試課目用量少，分離效率高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較高，不同地區(qū)半夏苯甲酸含量在0.014～1.568％。紫外吸收法可以測(cè)定半夏總蛋白的含量。SDS-PAGE結(jié)果顯示不同產(chǎn)地半夏具有相似的圖譜，半夏與其類似品圖譜差異較大，能夠起到鑒定作用。并用SDS-PAGE電泳法建立了半夏蛋白特征譜帶的分子量測(cè)定方法。建立了應(yīng)用IEF技術(shù)分離和鑒別半夏蛋白

4、的方法，多次實(shí)驗(yàn)顯示：IEF圖譜具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，為目前半夏蛋白質(zhì)鑒別較好的方法，它可以區(qū)別半夏及其類似品，還可以鑒別某些炮制品，如清半夏、姜半夏等。IEF技術(shù)不僅能夠較好地分離半夏蛋白質(zhì)，還可以對(duì)各種半夏蛋白質(zhì)特征譜帶的等電點(diǎn)(PI)進(jìn)行定量分析。運(yùn)用RAPD技術(shù)對(duì)半夏遺傳多樣性進(jìn)行了研究，分析結(jié)果顯示，半夏野生轉(zhuǎn)裁培對(duì)其遺傳多樣性影響較小，野生半夏物種水平上的多態(tài)性比裁培品種高出2個(gè)百分點(diǎn)，鐘祥野生半夏多態(tài)位點(diǎn)數(shù)最高，遺傳信