山茶靛牛肝菌抗腫瘤活性的研究.pdf

1、牛肝菌是牛肝菌科和松塔牛肝菌科等真菌的統(tǒng)稱，是野生但可以食用的菌類，其中有少數(shù)的牛肝菌品種有毒不能食用外，大部分的品種均可食用，包括牛肝菌品種中有苦味的，目前在慶元也在食用，研究發(fā)現(xiàn)牛肝菌含有豐富的蛋白質(zhì)，而且是優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)、同時(shí)，鉀、維生素B2的含量也比較高，而熱量、脂肪的含量比較低，是目前人類食用的食品中營養(yǎng)較好的產(chǎn)品，此種營養(yǎng)結(jié)構(gòu)對(duì)改善機(jī)體的蛋白質(zhì)、維生素B2營養(yǎng)狀況、預(yù)防高血脂、高血壓、冠心病等都具有良好的健康作用。山茶靛是牛肝

2、菌眾多品種中的一個(gè)，在慶元當(dāng)?shù)鼐哂惺秤玫挠凭脷v史，但長期以來，該牛肝菌都以俗名命名，并無確切的種名。而且目前關(guān)于牛肝菌的研究，大多集中在如何馴化和營養(yǎng)成分方向的研究，但對(duì)牛肝菌在抗腫瘤活性研究等方面的報(bào)道很少。本研究對(duì)山茶靛牛肝菌進(jìn)行種名的確定，并對(duì)山茶靛子實(shí)體分別進(jìn)行醇提和水提，提取物再分別進(jìn)行細(xì)胞體外抗腫瘤研究、并進(jìn)行分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定。
　　本論文共有4個(gè)部分，分別從子實(shí)體種名的確定、子實(shí)體的處理、體外細(xì)胞抗腫瘤試驗(yàn)、小分

3、子化合物的分離、純化以及結(jié)構(gòu)鑒定，活性研究。
　　1．山茶靛牛肝菌種名的確定
　　本章對(duì)山茶靛牛肝菌子實(shí)體的總DNA進(jìn)行提取，提取的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，并進(jìn)行分子擴(kuò)增，測序、比對(duì)，確定山茶靛牛肝菌的種名。
　　分別對(duì)慶元、景寧兩地的牛肝菌進(jìn)行總DNA的提取，采用CTAB法進(jìn)行，提取后純度高的DNA進(jìn)行ITS克隆，克隆后的產(chǎn)物進(jìn)行序列的測定，并把序列信息與GenBank進(jìn)行比對(duì)。序列的比對(duì)與生物形態(tài)上的鑒定相結(jié)合，確定山茶靛牛

4、肝菌屬于擬桃紅牛肝菌的一個(gè)變種。
　　2．山茶靛牛肝菌的題取及體外抗腫瘤試驗(yàn)
　　本章對(duì)山茶靛子實(shí)體分別進(jìn)行水提與醇提，醇提物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，萃取物再進(jìn)行體外細(xì)胞抗腫瘤試驗(yàn)，采用的細(xì)胞是：K562、SW620、wpmy、HepG2、LO2，山茶靛牛肝菌子實(shí)體水提物幾乎沒有抗腫瘤的功效，但對(duì)K562（人淋巴腫瘤細(xì)胞）有抑制效果。其它對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果主要體現(xiàn)在醇提物中，尤以氯仿部、乙酸乙酯部和正

5、丁醇部分，石油醚部其次。從山茶靛牛肝菌子實(shí)體醇提物對(duì) wpmy（人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞）以及LO2（人正常肝細(xì)胞）的試驗(yàn)可以看出，山茶靛牛肝菌子實(shí)體具有抗腫瘤的能力但對(duì)正常的wpmy、LO2細(xì)胞沒有毒害作用。
　　3．牛肝菌活性部分化合物的分離、純化
　　本章重點(diǎn)對(duì)有活性的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇分部進(jìn)行化合物的分離和純化，主要采用氯仿-甲醇，石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，硅膠柱、Sephadex LH-20柱

6、層析，反相柱層析、制備薄層層析等方法分離，薄層層析檢測，共得到7個(gè)化合物。
　　4．化合物結(jié)構(gòu)鑒定及活性試驗(yàn)
　　將得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)測定，1H（400MHZ）和13C（100MHZ）NMR譜用Bruker DRX-400型超導(dǎo)核磁共振儀測定，測定的結(jié)果進(jìn)行分析，確定化合物的名稱及結(jié)構(gòu)，其化合物分別為：煙酸、腺苷、琥珀酸、麥角甾醇、腦苷脂B、甘露醇、2，3-吡啶二羧酸。
　　得到的化合物進(jìn)行體外細(xì)胞抗腫瘤試驗(yàn)，確定其