Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A和PCNA在膽管癌中的表達(dá)及意義的研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A和PCNA在膽管癌中的表達(dá)，探討其在膽管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制，為膽管癌診斷和治療尋找新的靶點(diǎn)。 方法: 1.實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采取膽管癌組織、相同個(gè)體癌旁膽管組織及其正常膽管組織 1.1采用免疫組化過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素法(SP)對(duì)42例膽管癌組織及20例正常組織中Survivin、VEGF-C及PCNA蛋白進(jìn)行檢測(cè)并結(jié)合患者的年齡、性別以

2、及腫瘤大小、部位、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理因素進(jìn)行綜合分析。所取的標(biāo)本均通過(guò)病理學(xué)診斷證實(shí)。 1.2采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)42例膽管癌和20例正常膽管組織的CyclinD1、CDC25A蛋白的表達(dá)，其中蛋白的表達(dá)量用平均熒光強(qiáng)度(均道值)來(lái)表示。所取的標(biāo)本均通過(guò)病理學(xué)診斷證實(shí)1.3采用RT-PCR方法檢測(cè)42例術(shù)中所取的新鮮的膽管癌組織、17例同個(gè)體癌旁膽管組織和20例正常膽管組織中Survivin、VEGF-C、Cyclin

3、D1、CDC25A及PCNA的mRNA表達(dá)，術(shù)中所取的標(biāo)本均通過(guò)病理學(xué)診斷證實(shí)。經(jīng)Gel-proanalyzer3.1軟件分析RT-PCR產(chǎn)物的光密度(optical density,OD)，計(jì)算Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A及PCNA的OD值與內(nèi)參照基因(glyceraldehyde-3-phosphatedehvdrogenase,GADPH)OD值的比值，作為目的基因產(chǎn)物mRNA的相對(duì)含量。

4、 2.應(yīng)用The SAS System for Windows v6.12軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，不同組別實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較采用方差分析(ANOVA)，進(jìn)一步兩兩比較采用t檢驗(yàn)(LSD法)；免疫組化結(jié)果采用卡方檢驗(yàn)；均以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，當(dāng)P<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.用免疫組化檢測(cè)42例膽管癌組織及其20例正常膽管組織Survivin、VEGF-C及PCNA的蛋白的表

5、達(dá)情況膽管癌組織、正常膽管組織中Survivin表達(dá)的陽(yáng)性率分別為78.57％和25.00％，膽管癌組織的陽(yáng)性率明顯高于正常組織；膽管癌組織、正常膽管組織中VEGF-C表達(dá)的陽(yáng)性率分別為83.33％和30.00％，膽管癌組織的陽(yáng)性率明顯高于正常組織；膽管癌組織、正常膽管組織中PCNA表達(dá)的陽(yáng)性率分別為71.19％和25.00％，膽管癌組織的陽(yáng)性率亦明顯高于正常組織。 2.用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)42例膽管癌組織及20例正常膽管組織Cyc

6、linD1和CDC25A的蛋白的表達(dá)情況膽管癌組織、正常膽管組織中CyclinD1蛋白表達(dá)分別為530.253±27.823、497.416±38.019，膽管癌組織的CyclinD1蛋白表達(dá)高于正常組織；膽管癌組織、正常膽管組織中CDC25A蛋白表達(dá)分別為534.029±35.674，497.276±42.343，膽管癌組織的CDC25A蛋白表達(dá)高于正常組織。 3.用RT-PCR方法檢測(cè)42例膽管癌組織、17例相同個(gè)體癌旁膽管

7、組織及其20例正常膽管組織中Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A及PCNA的mRNA表達(dá)情況膽管癌組織、同種個(gè)體癌旁組織及正常膽管組織中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.6238±0.080、0.5693±0.0443和0.5684±0.0317，Survivin mRNA在三組之間的表達(dá)呈下降趨勢(shì)；膽管癌組織、同種個(gè)體癌旁組織及正常膽管組織中VEGF-C mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.6930±0.

8、1078、0.6270±0.0664和0.6105±0.0577，VEGF-CmRNA在三組之間的表達(dá)呈下降趨勢(shì)；膽管癌組織、同種個(gè)體癌旁組織及正常膽管組織中CyclinD1 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.6288±0.0942、0.5608±0.0577和0.5845±0.0310，CyclinD1 mRNA在三組之間的表達(dá)呈下降趨勢(shì)；膽管癌組織、同種個(gè)體癌旁組織及正常膽管組織中CDC25A mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.5937±0.0

9、716、0.5229±0.0575和0.5135±0.0780，CDC25A mRNA在三組之間的表達(dá)呈下降趨勢(shì)；膽管癌組織、同種個(gè)體癌旁組織及正常膽管組織中PCNAmRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.6303±0.0773、0.5692±0.0408和0.5605±0.0331，PCNA mRNA在三組之間表達(dá)也呈下降趨勢(shì)。 結(jié)論： Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A及PCNA mRNA和蛋白在膽管