肺炎鏈球菌在蘇州地區(qū)兒童急性呼吸道感染中的地位及其耐β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物相關(guān)基因的研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開： 第一部分肺炎鏈球菌兒童急性呼吸道感染的流行病學(xué)特征及耐藥性 目的：了解肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumonia, SP)在蘇州地區(qū)兒童呼吸道感染中的感染情況；探討SP感染的流行病學(xué)特征；了解本地區(qū)SP對(duì)抗菌藥物尤其是對(duì)β-內(nèi)酰胺類的敏感性。 方法：選取2006年1月～2008年12月蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸科4865例急性呼吸道感染住院患兒，采用無(wú)菌負(fù)壓吸引法采集新鮮

2、痰液，分離培養(yǎng)得到SP株的純培養(yǎng)物。用紙片擴(kuò)散法(Kirby-Bauer法，K-B法)測(cè)定9種抗生素的藥物敏感性，對(duì)其中79株SP以E-test法測(cè)定4種β-內(nèi)酰胺類抗生素最小抑菌濃度(nunimalinhibitory concentrations, MICS)。 結(jié)果：4865例痰標(biāo)本中，檢測(cè)到509株SP，陽(yáng)性率為10.5％。三年間SP檢出率無(wú)明顯差異。SP以3～5歲兒童最為易感，無(wú)性別差異，春冬季感染率較高。SP導(dǎo)致的疾

3、病主要為支氣管肺炎(86.2％)，臨床表現(xiàn)主要為咳嗽(96.9％)、發(fā)熱(60.3％)、喘息(49.3％)、肺部羅音(81.6％)和胸片異常(90.4％)。SP感染患兒易合并鼻-鼻竇炎。單純SP感染149例，合并感染病原中以支原體和合胞病毒最為多見，分別為28.5％和17.5％。檢出的SP株對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素的耐藥率均在90％以上，對(duì)氯霉素、氧氟沙星、利福平的耐藥率較低，未發(fā)現(xiàn)對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥株。79株SP中91.1％為中介株，對(duì)

4、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟的耐藥率分別為87.3％、32.9％、10.1％。93.7％的SP株存在多重耐藥現(xiàn)象，在耐藥(R)模式上，以紅霉素+復(fù)方新諾明+克林霉素+四環(huán)素+頭孢呋辛最常見(29.1％)。 結(jié)論：(1)肺炎鏈球菌為蘇州地區(qū)兒童呼吸道感染中最易感的細(xì)菌病原。(2)全年均存在SP感染，流行高峰在春冬季。(3)SP感染的臨床特征無(wú)特異性，引起的感染主要表現(xiàn)為下呼吸道感染。(4) SP對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、頭孢呋辛

5、的耐藥率極高，對(duì)青霉素、頭孢曲松以中介為主，對(duì)頭孢噻肟的耐藥率相對(duì)較低，隨著青霉素MIC值的增高，SP對(duì)其它抗生素的耐藥率亦呈上升趨勢(shì)。蘇州地區(qū)SP耐藥形勢(shì)嚴(yán)峻，臨床上對(duì)SP感染的治療有待調(diào)整。 第二部分肺炎鏈球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥相關(guān)基因的研究 目的：分析肺炎鏈球菌(SP)β-內(nèi)酰胺類耐藥相關(guān)基因PBP1a.2b、2x序列的氨基酸變異情況及其與β-內(nèi)酰胺類抗生素最小抑菌濃度(MIC)的關(guān)系。 方法：選取

6、2008年4月～2008年10月于蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院收集到的各種來(lái)源SP標(biāo)本59株，以E-test法測(cè)定4種β-內(nèi)酰胺類抗生素MIC，對(duì)各株SP的青霉素結(jié)合蛋白(perucillin binding proteins，PBPs)基因PBP1a、2b和2x的青霉素結(jié)合區(qū)域(penicillin binding domain PBD)以巢式PCR擴(kuò)增及測(cè)序，將其與SP標(biāo)準(zhǔn)株R6序列進(jìn)行比對(duì)，分析氨基酸變異情況。 結(jié)果：59株SP中

7、PSSP株8例(13.5％)，PISP株46例(78.0％)，PRSP株5例(8.5％)。兩株P(guān)RSP未檢出PBP1a。已證實(shí)與耐藥相關(guān)的活化位點(diǎn)突變?cè)诒狙芯恐芯邪l(fā)現(xiàn)，如PBP1a中Thr371→Ala/Ser，PBP2b中Thr451→Ala、Glu481→Gly以及PBP2x中Thr338→Ala。同時(shí)本次研究亦發(fā)現(xiàn)一些少見的變異位點(diǎn)，如PBP2x中Ser337→Thr、Gln552→Glu(使頭孢菌素MIC值增加約3倍)，PBP

8、2b中Gly472→Leu、Ser474→Asn、Gly488→Ala及PBP1a中Ser351→Ala、Ile358→Thr。一些位點(diǎn)的氨基酸置換與β-內(nèi)酰胺類MIC值密切相關(guān)，PBP2x中Thr338→Ala、Met339→Phe、Met400→Thr和Arg384→Gly的聯(lián)合突變株(占45.6％，26/57)頭孢菌素類MIC值顯著增高，平均MIC≥5.0μg/ml；PBP2b中Ala624→Gly、570QLQPT→AIDTK的

9、聯(lián)合附加突變(占49.2％，29/59)可使頭孢菌素類的平均MIC值升高3倍以上，青霉素MIC平均值達(dá)1.0μg/ml；PBP1a氨基酸變異表型較為單一，均為三個(gè)保守序列(附近)Thr371→Ala/Ser、Pro432→Thr和574TSQF577→NTGY的同時(shí)變異，在此基礎(chǔ)上Ser351→Ala、Ile358→Thr的變異可不同程度的增加β-內(nèi)酰胺類MIC值，達(dá)到中介至耐藥水平。部分具有相同氨基酸變異的SP株出現(xiàn)不同的β-內(nèi)酰胺類