去甲二氫愈創(chuàng)木酸對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型治療作用的研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EM)是育齡期婦女的常見病和多發(fā)病，近年來(lái)發(fā)病率有上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響患者的身心健康。其發(fā)病機(jī)制目前還不明確，新血管生成成為一種新的病因?qū)W說(shuō)，抗血管生成治療成為目前EM治療研究的熱點(diǎn)。去甲二氫愈創(chuàng)木酸(Nordihydroguaiareticacid，NDGA)是從長(zhǎng)青灌木中提取的一種天然藥物成分，也可以人工合成，具有脂氧合酶(Lipoxygenase，LOX)抑制作用。NDGA已被證實(shí)具

2、有多種生物學(xué)作用，如抗炎、抗氧化、降血糖、抗腫瘤、抗過(guò)敏等。本實(shí)驗(yàn)所使用的NDGA是從Larrea tridentata長(zhǎng)青灌木中提取的天然藥物成分，旨在通過(guò)建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，研究NDGA對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)、胎肝激酶-1/含激酶插入功能區(qū)受體(fetal liver kinase1/kinaseinsert dom

3、ain-containing receptor，F(xiàn)lk-1/KDR)、5-脂氧合酶(5-lipoxygenase，5-LOX)表達(dá)的影響，探討NDGA對(duì)EM治療作用的可行性，為EM的治療開辟新的途徑。
　　 方法：
　　 1、大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的建立
　　 健康性成熟雌性未交配SD大鼠50只，體重200±20g。術(shù)前給予0.02mg/kg己烯雌酚灌胃5天，使手術(shù)時(shí)大鼠統(tǒng)一處于動(dòng)情期。以濃度為43g/t，的水合

4、氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，腹中線恥骨上1cm處切開約2cm長(zhǎng)切口，分離出大鼠的右側(cè)子宮，近輸卵管端切下一段長(zhǎng)約1cm的子宮段，切割成5mm×5mm大小的子宮片，將切好的子宮片內(nèi)膜面緊貼左側(cè)腹壁，絲線固定，向腹腔滴入0.2ml慶大霉素注射液，逐層關(guān)腹。術(shù)后肌肉注射慶大霉素0.1ml/只×5d。術(shù)后第10天起給予己烯雌酚灌胃×5d。術(shù)后4周開腹，觀察移植物生長(zhǎng)情況，測(cè)量異位病灶的體積。
　　 2、大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的藥物

5、治療
　　 將造模成功的39只大鼠隨機(jī)分成5組，空白對(duì)照組，NDGA低、中、高劑量組及米非司酮組。低、中、高劑量組分別按30 mg/kg，60 mg/kg，90 mg/kg劑量皮下注射3％NDGA，隔日1次，共計(jì)20d?？瞻讓?duì)照組注射按60 mg/kg隔日皮下注射PBS液，共20d。米非司酮組按2mg/kg灌胃×28d。治療結(jié)束后分別取大鼠腹腔沖洗液和3ml腹主動(dòng)脈血，離心，取上清-70℃保存，用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)

6、5-LOX值。取在位和異位子宮內(nèi)膜，10％福爾馬林固定，采用免疫組化PV兩步法檢測(cè)VEGF、KDR、5-LOX的表達(dá)。
　　 所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以方差分析和非參數(shù)檢驗(yàn)法進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、異位病灶生長(zhǎng)情況
　　 術(shù)后四周移植內(nèi)膜成活率為78％(39/50)，異位灶平均體積為1.29.639±17.627mm3。治療后空白對(duì)照組ND

7、GA低、中、高劑量組及米非司酮組異位內(nèi)膜抑制率分別為-17.90±2.45％、14.49±1.04％、40.26±2.73％、59.05±1.82％、57.16±2.57％?？瞻讓?duì)照組治療后體積較治療前顯著增大，與其他個(gè)治療組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。NDGA低劑量組異位病灶體積未見明顯縮小，NDGA三個(gè)劑量組隨著劑量的增加抑制率上升，三組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。米非司酮組抑制率顯著高于NDGA低劑量組和中劑量組，

8、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；與高劑量組比較，無(wú)顯著性差異，P>0.05。NDGA中劑量組、高劑量組和米非司酮組異位病灶體積縮小，異位內(nèi)膜腺體數(shù)目較空白對(duì)照組和低劑量組數(shù)目減少、腺腔縮小，間質(zhì)纖維化。
　　 2、血清及腹腔液5-LOX水平
　　 空白對(duì)照組血清和腹腔液5-LOX水平均顯著高于NDGA三個(gè)治療組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；隨著NDGA劑量的增加血清和腹腔液5-LOX水平下降越明顯，三個(gè)劑量組間相比較均具

9、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。米非司酮組血清和腹腔液5-LOX水平均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他各治療組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。
　　 空白對(duì)照組和NDGA低劑量組的腹腔液5-LOX水平均顯著高于其血清5-LOX水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。NDGA中、高劑量組和米非司酮組的血清5-LOX水平與其腹腔液5-LOX水平比較無(wú)顯著性差異，P>0.05。
　　 3、免疫組化結(jié)果
　　 3.1 VEGF主要在在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞

10、胞漿中表達(dá)。NDGA低劑量組、中劑量組、米非司酮組、高劑量組在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜VEGF的表達(dá)強(qiáng)度依次下降，均顯著低于空白對(duì)照組，P<0.05。NDGA高、中、低三個(gè)劑量組間VEGF表達(dá)強(qiáng)度的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并隨劑量的增加表達(dá)強(qiáng)度下降越明顯。米非司酮組在位及異位內(nèi)膜的VEGF表達(dá)強(qiáng)度低于NDGA中劑量，高于NDGA高劑量組，但與兩組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。
　　 3.2 KDR主要在在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞

11、胞漿、間質(zhì)和部分血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中表達(dá)。NDGA低劑量組、中劑量組、米非司酮組和高劑量組在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜KDR的表達(dá)強(qiáng)度依次下降，均低于空白對(duì)照組，P<0.05。NDGA三個(gè)劑量組之間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并隨劑量的增加KDR表達(dá)強(qiáng)度下降越明顯。米非司酮組在位及異位內(nèi)膜的KDR表達(dá)強(qiáng)度低于在NDGA中劑量組的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高于在NDGA高劑量組的表達(dá)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.35-LOX主要在在位內(nèi)膜及異位

12、內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞漿和胞核中表達(dá)?？瞻讓?duì)照組、NDGA低劑量組、中劑量組和高劑量組在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜的5-LOX表達(dá)強(qiáng)度依次下降，各組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，并隨NDGA劑量的增加5-LOX表達(dá)強(qiáng)度下降越明顯。米非司酮組在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜5-LOX表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于其他各實(shí)驗(yàn)組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。
　　 結(jié)論：
　　 1、自體子宮移植法建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型具有可行性。
　　 2、N

13、DGA中劑量(60 mg/kg)和高劑量(90 mg/kg)對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥具有著抑制作用，可以顯著抑制在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜5-LOX、VEGF、KDR的表達(dá)，并能顯著降低血清及腹腔液5-LOX濃度，對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥有治療作用。NDGA30mg/kg對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥無(wú)明顯抑制作用。NDGA90 mg/kg組為最佳治療效果組。
　　 3、NDGA對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用呈劑量依賴性。NDGA可能是主要通過(guò)抑制在位及異位