2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、基因治療作為一種能治療遺傳疾病、惡性腫瘤、病毒感染以及神經(jīng)性疾病的潛在治療方法得到了廣泛的研究。安全且高效基因載體系統(tǒng)是實現(xiàn)基因治療的關鍵之一,也是目前基因治療領域的研究熱點。相比傳統(tǒng)的病毒性基因載體,非病毒性基因載體有著相對較高的生物相容性和較低的免疫原性,并且易于改性和大規(guī)模生產(chǎn)。聚乙烯亞胺(PEI)作為一種應用最廣泛的陽離子聚合物基因載體,受到了廣泛的關注,也是非病毒性基因載體的金標準之一。但是其較高的細胞毒性也限制了其在基因治療

2、領域的進一步發(fā)展。PEI的細胞毒性主要來自于其與DNA形成復合物表面過剩的正電荷與細胞的的相互作用。為了減少PEI復合物的毒性,研究者們采用了多種手段來屏蔽其過剩的正電荷,但或多或少也降低了復合物與細胞的相互作用,從而降低了PEI復合物的轉(zhuǎn)染效率。
  因此,本論文采用了一種在內(nèi)涵體中可電荷反轉(zhuǎn)的改性牛血清白蛋白(mBSA)來制備 PEI/DNA/mBSA三元復合物,這種復合物有著良好的生物相容性以及比PEI/DNA二元復合物更高

3、的轉(zhuǎn)染效率。本文首先制備了等電點為5.8的牛血清白蛋白,并采用基質(zhì)輔助激光解吸-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF)表征其相對分子量。在中性條件下將mBSA與PEI/DNA二元復合物通過靜電作用復合形成PEI/DNA/mBSA三元復合物。動態(tài)光散射和透射電子顯微鏡證明了三元復合物在pH5.5的環(huán)境中發(fā)生解離,mBSA通過電荷反轉(zhuǎn)從復合物上脫落。瓊脂糖凝膠電泳實驗結果證明mBSA的引入不影響PEI對DNA的負載。MTT實驗表明mBSA具有良

4、好的生物相容性,并且能顯著提高PEI/DNA復合物的生物相容性。在HepG2和293T細胞上的轉(zhuǎn)染結果表明,PEI/DNA/mBSA三元復合物的轉(zhuǎn)染效率要大于PEI/DNA二元復合物,并且PEI/DNA/mBSA三元復合物有一定的抵抗血清的能力。采用流式細胞儀表征細胞對復合物的內(nèi)吞,證明了細胞對三元復合物的攝取要略小于二元復合物;但激光共聚焦顯微鏡證明, PEI/DNA/mBSA三元復合物的內(nèi)涵體逃逸效率遠高于PEI/DNA二元復合物。

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