CXCL12-CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達及其意義的研究.pdf

1、為探討CXCL12-CXCR4在肝外膽管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機制。本研究進行了以下工作：1、回顧性調(diào)查肝外膽管癌的外科治療和影響預(yù)后的因素。2、采用IHC、RT-PCR、Western blot技術(shù)研究CXCL12-CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達及其臨床病理學(xué)意義。3、采用IHC、RT-PCR技術(shù)研究CXCL12-CXCR4對肝外膽管癌浸潤轉(zhuǎn)移以及淋巴管形成的影響。4、研究FOXP3+Treg細胞在肝外膽管癌中的浸潤情況，分析其對誘

2、導(dǎo)免疫耐受以及預(yù)后的影響。 本研究論文共分為四個部分： 1、 161例肝外膽管癌的外科治療和預(yù)后分析 目的：探討肝外膽管癌(EHCC)的臨床特征、治療方法對遠期生存率的影響及EHCC切除術(shù)后的預(yù)后因素。 方法：對1995年4月至2006年7月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院收治的161例EHCC的臨床特點、診斷、手術(shù)方式和隨訪結(jié)果進行回顧分析。選擇對EHCC切除術(shù)后預(yù)后可能產(chǎn)生影響的臨床因素，通過Cox比例風(fēng)險模型進

3、行多因素的預(yù)后分析。 結(jié)果：161例手術(shù)治療的EHCC，根治性切除110例，姑息性切除32例，引流或探查組19例。161例患者總體1、2、3、5年生存率分別為74.9％、45.3％、36.5％和11.1％。Cox分析結(jié)果表明肝臟浸潤、門脈或肝動脈侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是EHCC根治切除影響預(yù)后的獨立因素(P<0.05)。根治性切除是提高EHCC遠期生存率及改善生活質(zhì)量的關(guān)鍵，肝葉切除和(或)胰十二指腸切除聯(lián)合骨骼化切除是提高根治切除率

4、及遠期療效的重點。 2、 趨化因子CXCL12及其特異性受體CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達及其意義 目的：探討趨化因子CXCL12及其特異性受體CXCR4表達對肝外膽管癌臨床進展和預(yù)后的影響以及相互關(guān)系。 方法：分別采用免疫組化、RT-PCR和Western blot方法檢測CXCL12和CXCR4在82例肝外膽管癌中的表達，并對臨床指標(biāo)和預(yù)后進行分析。 2.1 肝外膽管癌中CXCL12免疫組化染色結(jié)

5、果 CXCL12表達于胞漿和胞膜，呈棕黃色?；|(zhì)成纖維細胞弱表達。82例肝外膽管癌組織中，CXCL12蛋白陽性表達率為92.7％，強陽性表達率為25.6％；弱陽性率為31.7％；7例膽道良性腫瘤中CXCL12陽性表達率為57.1，無強陽性表達；12例非腫瘤膽道上皮組織中CXCL12陽性表達率為16.7％，無強陽性表達。CXCL12蛋白在肝外膽管癌中的表達顯著高于膽道良性腫瘤和非腫瘤膽道上皮組織中的表達，(P<0.01)。

6、 2.2 肝外膽管癌中CXCR4免疫組化染色結(jié)果 CXCR4主要表達于肝外膽管癌細胞的胞漿和胞膜，細胞漿內(nèi)彌散狀分布。淋巴樣細胞同樣表達。82例肝外膽管癌組織中，CXCR4蛋白陽性表達率為75.6％，強陽性表達率為8.5％；弱陽性表達率為45.1％；7例膽道良性腫瘤中CXCR4陽性表達率為28.6％，無強陽性表達；12例非腫瘤膽道上皮組織中無CXCR4蛋白表達。CXCR4蛋白在肝外膽管癌中的表達高于膽道良性腫瘤和非腫瘤膽道上

7、皮組織中的表達，差異顯著(P<0.01)。 2.3 肝外膽管癌組織中CXCL12蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系 CXCL12蛋白的表達與肝外膽管癌臨床進展有相關(guān)的趨勢，II～IV期高于I期的表達(42.7％ vs 18.3％，P=0.068)。 2.4 肝外膽管癌組織中CXCR4蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系 CXCR4蛋白的表達與肝外膽管癌臨床進展有相關(guān)的趨勢，II～IV期高于I期的表達(22.4％VS

8、 7.3％，P=0.088)。 2.5 CXCL12表達對肝外膽管癌預(yù)后的影響 Kaplan-Meier生存曲線顯示，CXCL12高表達組中位生存時間27個月，低表達組中位生存時間24個月。單因素分析檢驗表明，CXCL12高表達組與低表達組之間差異無顯著性(P>0.05)。 2.6 CXCR4表達對肝外膽管癌預(yù)后的影響 Kaplan-Meier生存曲線顯示，CXCR4高表達組中位生存時間27個月，低表達

9、組中位生存時間18個月。單因素分析檢驗表明，CXCR4高表達組與低表達組之間差異無顯著性(P>0.05)。 2.7 CXCL12 mRNA在肝外膽管癌組織中的表達 肝外膽管癌組織中CXCL12 mRNA的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相對表達量為0.32±0.4，明顯高于非轉(zhuǎn)移組(0.09±0.02，P<0.05)；II、III期病例CXCR4 mRNA的表達明顯高于I期病例(0.50±0.15 VS

10、 0.24±0.02，P<0.05)。CXCL12 mRNA在低分化組和高中分化組的相對表達量分別為0.23±0.09和0.10±0.01，無顯著差異(P>0.05)。 2.8 CXCR4 mRNA在肝外膽管癌組織中的表達 半定量RT-PCR結(jié)果分析表明，肝外膽管癌組織中CXCR4 mRNA的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組的相對表達量分別為0.44±0.07和0.23±0.03，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

11、明顯高于非轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；II、III期病例CXCR4 mRNA的表達明顯高于I期病例(0.43±0.07 VS 0.25±0.08，P<0.05)。CXCR4 mRNA在不同分化程度病例中的表達無明顯差異(P>0.05)。 2.9 Western blot法檢測CXCR4在肝外膽管癌組織中的表達 采用圖像分析系統(tǒng)對雜交條帶進行定量分析表明，CXCR4蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組相對表達水平分別為0.28±0.

12、17和0.20±0.19，兩者無顯著差異(P>0.05)；CXCR4蛋白在低分化組和高中分化組之間及不同臨床分期病例間的表達水平均無明顯差異(P均>0.05)，提示肝外膽管癌組織中CXCR4在mRNA和蛋白水平上表達的意義有一定差異。 2.10 CXCL12與CXCR4在肝外膽管癌中表達的相關(guān)關(guān)系CXCL12與CXCR4之間無相關(guān)關(guān)系(r=0.095，P>0.05)；但是在II～IV期，CXCL12與CXCR4之間存在正相關(guān)關(guān)系(P=0

13、.05)。 3、 CXCL12-CXCR4對肝外膽管癌浸潤轉(zhuǎn)移以及淋巴管形成的影響 目的：探討VEGF-C、MMP-9表達對肝外膽管癌臨床進展和預(yù)后的影響以及與CXCL12的相互關(guān)系。 方法：分別采用免疫組化和RT-PCR方法檢測VEGF-C和MMP-9在77例肝外膽管癌中的表達，分析了其臨床病理和預(yù)后意義。 4、 肝外膽管癌中CXCL12-CXCR4的表達與FOXP3+Treg細胞聚集的關(guān)系 目

14、的：探討FOXP3+Treg細胞聚集對肝外膽管癌臨床進展和預(yù)后的影響以及其與相關(guān)基因表達的相互關(guān)系。 方法：采用免疫組織化學(xué)方法檢測FOXP3+和COX-2蛋白在肝外膽管癌、膽道良性腫瘤和非腫瘤膽管上皮組織中的表達情況。 結(jié)論： 1.肝臟浸潤、門脈或肝動脈侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是EHCC根治切除影響預(yù)后的獨立因素。 2.根治性切除是提高EHCC遠期生存率及改善生活質(zhì)量的關(guān)鍵，肝葉切除和(或)胰十二指腸切除聯(lián)合骨

15、骼化切除是提高根治切除率及遠期療效的重點。 3.CXCL12和CXCR4的表達從非腫瘤膽管上皮組織、膽管良性腫瘤到肝外膽管癌有不斷增高的趨勢，提示它們可能參與了肝外膽管癌的發(fā)生。CXCL12和CXCR4的表達與肝外膽管癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。它們可能共同促進肝外膽管癌的浸潤、轉(zhuǎn)移過程。 4.CXCL12表達與VEGF-C和MMP-9表達正相關(guān)。VEGF-C和MMP-9的表達從非腫瘤膽管上皮組織、膽管良性腫瘤到肝

16、外膽管癌不斷增高。VEGF-C和MMP-9的表達與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化密切相關(guān)，是影響肝外膽管癌進展的重要因素，并且是肝外膽管癌的獨立影響因素。 5.FOXP3+Treg細胞聚集與肝外膽管癌中CXCL12和CXCR4的表達無關(guān)；COX-2蛋白表達與FOXP3+Treg細胞聚集之間存在明顯的正相關(guān)。 6.肝外膽管癌中存在著FOXP3+Treg細胞的浸潤，其聚集的數(shù)目顯著高于非腫瘤膽管上皮組織和膽管良性腫瘤，但是，