萬年蒿抗肝損傷和抗腫瘤有效部位及其化學(xué)成分的研究.pdf

1、萬年蒿是在吉林省延邊地區(qū)有著廣泛應(yīng)用基礎(chǔ)的一個(gè)朝藥，為菊科蒿屬植物萬年蒿 Artemisia sacrorum Ledeb.的干燥地上部分，功能健脾利濕，退黃?？蓡斡?，也可配伍使用。在延邊地區(qū)應(yīng)用萬年蒿膏劑，預(yù)防和治療各種急慢性肝炎，有悠久的應(yīng)用歷史。在治療黃疸、脅痛等肝炎癥狀時(shí)，老百姓愿意選用萬年蒿作為首選藥物。
　　本研究在多年的肝保護(hù)動物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，篩選出萬年蒿肝保護(hù)有效部位ASE，并對其進(jìn)行了作用機(jī)理研究。結(jié)果表明，在施用

2、APAP之前預(yù)先對小鼠灌服ASE，能夠明顯抑制血清中冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST），丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT），腫瘤壞死因子（TNF-α）含量，抑制小鼠肝組織中谷胱甘肽（GSH）消耗，丙二醛（MDA）蓄積。另外，如肝臟組織病理學(xué)分析和DNA fragmentation analysis所示，ASE預(yù)防APAP所致細(xì)胞凋亡和壞死。還有，根據(jù)蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果，ASE顯著減少APAP所致小鼠肝臟中caspase-3和-8的蛋白質(zhì)表達(dá)。以上結(jié)果提示，AS

3、E對APAP所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用可能和其抑制脂質(zhì)過氧化作用和TNF-α調(diào)節(jié)的細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　因?yàn)橹靖魏透螕p傷有著密切的聯(lián)系，本實(shí)驗(yàn)研究了對肝臟脂質(zhì)蓄積有緩解作用的有效部位及其作用機(jī)理。結(jié)果表明，當(dāng)用95％EE處理HepG2細(xì)胞時(shí)，觀察到甘油三酯含量的顯著減少及AMPK和乙酰輔酶A羧化酶（ACC）磷酸化的明顯增加。95%EE抑制了脂肪生成的基因表達(dá)SREBP1c和其靶基因諸如脂肪酸合酶（FAS），硬脂酰輔酶A去飽和酶1（S

4、CD1），并呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。另一方面，脂肪分解基因表達(dá)，諸如過氧物酶體增殖子激活受體α(PPAR-α)和CD36增加了，并呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。而當(dāng)用AMPK抑制劑compound C進(jìn)行預(yù)處理后，這些效果受到明顯抑制。然而，SREBP2，低密度脂肪蛋白受體（LDLR），β-羥基-β-甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-CoA）和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)的基因表達(dá)沒有顯著差異。同時(shí)，95% EE明顯增加脂肪酰輔酶 A（ACOX）的

5、基因表達(dá)，并呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。這些結(jié)果表明，95%EE通過激活 AMPK減緩肝臟脂肪蓄積，有可能在預(yù)防、治療脂肪肝，肥胖癥，二型糖尿病等疾病過程中起到積極作用。
　　根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，很多蒿類植物，諸如Artemisia anomala奇蒿,青蒿Artemisiaannua等,具有潛在的抗腫瘤作用。其中，對青蒿的研究最多而且成果也最顯著。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，青蒿素及其衍生物對人體外腫瘤細(xì)胞和多種動物體內(nèi)腫瘤模型具有抑制作用。多項(xiàng)研究表

6、明青蒿素及其衍生物與傳統(tǒng)化療藥無交叉耐藥，且可逆轉(zhuǎn)耐藥，有望成為新的廣譜、高效、低毒的抗癌藥物。萬年蒿與青蒿同屬蒿類植物，含有許多結(jié)構(gòu)相似的化學(xué)成分如萜類、香豆素及黃酮類等，有可能對癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用。為了進(jìn)一步探索萬年蒿的抗腫瘤作用，采用3種人腫瘤細(xì)胞株：肝癌細(xì)胞株（HepG2），結(jié)腸癌細(xì)胞株（HT-29）、乳腺癌細(xì)胞株（MCF-7），和一種正常人腎細(xì)胞株（HEK293細(xì)胞），對萬年蒿的乙醇提取物、正丁醇提取物等9個(gè)部位進(jìn)行了體外

7、抗腫瘤有效部位篩選實(shí)驗(yàn)。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其中的二氯甲烷提取物對HepG2，HT-29、MCF-748小時(shí) EC50值分別為122.35，49.56和28.51μg/ml，顯示了最強(qiáng)的細(xì)胞毒性。另一方面，二氯甲烷提取物對正常人腎細(xì)胞株（HEK293細(xì)胞）的8小時(shí) EC50值只有150.20μg/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對HT-29、MCF-7的EC50值，顯示了較好的選擇性。
　　在探索萬年蒿抗肝損傷和抗癌有效部位作用機(jī)理的同時(shí)，我們對

8、萬年蒿這兩個(gè)有效部位的化學(xué)成分進(jìn)行了提取、分離及鑒定。
　　其中，我們從二氯甲烷抗癌活性部位中共分離得到6個(gè)單體化合物，經(jīng)鑒定，分別為：異東莨菪素（1），東莨菪素（2），β－谷甾醇（3），香豆素（4），蕪花素（5），金合歡素（6）。有文獻(xiàn)報(bào)道，其中的異東莨菪素，蕪花素，金合歡素和東莨菪素通過抑制細(xì)胞繁殖，引起細(xì)胞凋亡，抑制相關(guān)基因表達(dá)等多種機(jī)理，能夠不同程度地對肺癌、結(jié)腸癌、胃癌等各種人癌細(xì)胞有抑制作用，在預(yù)防癌癥轉(zhuǎn)移、治療癌癥等