松花粉多糖的提取、純化、硫酸酯化及活性研究.pdf

1、研究發(fā)現(xiàn)多糖具有增進(jìn)免疫、抗腫瘤、抗病毒、抗感染、抗衰老、抗凝血、降血脂、降血糖等功能,已應(yīng)用于臨床的多糖有香菇多糖、裂褶多糖、云芝多糖等.近年來花粉多糖已經(jīng)被人們開始注意,但關(guān)于松花粉多糖的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道不多.松花粉具有增強(qiáng)免疫等多種生物功能,其中馬尾松花粉應(yīng)用最為廣泛.闡明松花粉具體功效成分對(duì)于深層次開發(fā)松花粉具有重要意義,所以本實(shí)驗(yàn)對(duì)馬尾松花粉多糖及活性進(jìn)行了研究. 實(shí)驗(yàn)具體分為以下四個(gè)部分: 一、馬尾松花粉多糖的

2、提取與酯化改性:采用熱水浸提法提取,40﹪、60﹪、80﹪乙醇分級(jí)沉淀,取60﹪分級(jí)多糖硫酸酯化法改性.總多糖提取得率為3.256±0.230﹪;酯化60﹪多糖改性得率為150.6﹪. 二、馬尾松花粉多糖的理化性質(zhì)測(cè)定及純化:定性和定量分析樣品含糖量;HPLC分析單糖組分;凝膠層析各級(jí)分多糖,并使用核磁共振法對(duì)層析所得多糖樣品進(jìn)行初步結(jié)構(gòu)分析.紫外光譜顯示多糖無明顯核酸蛋白雜質(zhì);紅外光譜表明多糖主要具有糖類特征吸收峰,酯化60﹪

3、多糖具有硫酯基團(tuán)特征吸收峰.60﹪多糖校正含糖量為83.24﹪,排除硫酸基影響,基本都是多糖組分,酯化60﹪多糖硫酸基取代度為1.471;HPLC分析單糖組分得40﹪多糖主要含有葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖,60﹪松花粉多糖主要含有阿拉伯糖和半乳糖,80﹪多糖主要含有半乳糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和甘露糖.40﹪多糖純化得到6mg樣品,核磁檢測(cè)單糖組分仍不單一. 三、馬尾松花粉多糖的體內(nèi)抗腫瘤研究及安全性初步分析:選取得率最高的60﹪

4、多糖和酯化60﹪多糖作體內(nèi)S180肉瘤實(shí)驗(yàn),并對(duì)酯化60﹪多糖進(jìn)行了經(jīng)口和腹腔注射安全性分析.實(shí)驗(yàn)證明60﹪多糖最大抑瘤率為43.30﹪.毒副作用小,且具有促進(jìn)免疫活性的功能.酯化60﹪多糖最大抑瘤率為693.27﹪,對(duì)S180荷瘤小鼠存活時(shí)間的延長(zhǎng)率為60.05﹪,酯化改性后大大提高了多糖的抗腫瘤活性.體內(nèi)免疫實(shí)驗(yàn)表明,酯化60﹪多糖促進(jìn)NK細(xì)胞活性,促進(jìn)率為81.89﹪:抑制IL-1β,抑制率為58.02﹪;促進(jìn)IL-4,促進(jìn)率為4

5、9.85﹪,說明調(diào)節(jié)免疫是其抑制腫瘤的機(jī)制之一.高劑量酯化60﹪多糖腹腔注射有毒性作用,分析其機(jī)制可能是影響肌肉收縮. 四、馬尾松花粉多糖對(duì)體外培養(yǎng)癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞的作用:酯化60﹪多糖對(duì)HepG2、BGC.823、A549三種癌細(xì)胞有不同程度的直接抑制作用(非凋亡途徑),其中對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞的抑制率最高,為39.90﹪:對(duì)免疫細(xì)胞增殖或吞噬有很強(qiáng)的促進(jìn)作用,其中對(duì)B、T淋巴細(xì)胞的促增殖率分別為221.4﹪,155.3﹪,對(duì)

6、巨噬細(xì)胞吞噬促進(jìn)率為53.44﹪,說明其通過增強(qiáng)免疫和殺傷癌細(xì)胞抑癌.60﹪多糖主要通過增強(qiáng)免疫抑癌. 五、本實(shí)驗(yàn)首次從生理角度上發(fā)現(xiàn)了酯化多糖對(duì)哺乳動(dòng)物腸道平滑肌收縮有抑制作用;60﹪多糖和酯化60﹪多糖對(duì)蟾蜍心肌收縮幅度主要有增強(qiáng)作用,對(duì)收縮頻率有抑制作用. 本實(shí)驗(yàn)表明松花粉酯化60﹪多糖具有作為一種新抗癌藥物開發(fā)的潛能,且可在治療肌肉組織相關(guān)疾病方面做探索研究.酯化60﹪多糖和未酯化松花粉多糖都具有增強(qiáng)免疫的功能,