磺?；锹∶庖叻治龌瘜W(xué)研究.pdf

1、本實驗以磺?；锹『袜徏籽豸驶交酋０窞檠芯繉ο?，采用琥珀酸酐法，分別合成了目標(biāo)分析物的半抗原SMH和MSH。采用活性酯法將半抗原與載體蛋白BSA共價偶聯(lián)，制備了人工抗原，經(jīng)紫外掃描確定偶聯(lián)成功后，分別以SMH-BSA和MSH-BSA為免疫原免疫新西蘭白兔，分別獲得了針對兩種半抗原的特異性抗血清。雙向瓊脂擴(kuò)散法測定抗血清效價大于32/1后采集血清。以硫酸銨分步鹽析法分離抗血清中的抗體，冷凍干燥后．20℃保存。用活性酯法制備了酶標(biāo)半抗原SM

2、H．HRP和MSH-HRP，酶標(biāo)記物既保持了免疫化學(xué)特性，又保持了酶活性，可用于免疫化學(xué)分析。 篩選了包被抗體一酶標(biāo)半抗原(E-H)直接競爭ELISA法中最合適的抗體包被濃度、酶標(biāo)半抗原稀釋倍數(shù)以及反應(yīng)所用磷酸鹽緩沖液(PB)的pH值、濃度等。結(jié)果表明：在中性略偏堿條件下有利于抗體在酶標(biāo)板上的吸附，在中性略偏酸性條件下有利于抗原抗體的親和反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)增大PB的濃度有利于抗體與目標(biāo)物的親和。甲醇對抗原抗體的親和力影響較大，乙

3、腈影響相對較小，但試驗中其含量應(yīng)小于5％。 成功建立了磺?；锹≈苯痈偁幟嘎?lián)免疫吸附分析法。方陣試驗確定了抗體最佳包被濃度和酶標(biāo)半抗原(SMH-HRP)最佳稀釋度。在優(yōu)化條件下，建立了磺?；锹〉臉?biāo)準(zhǔn)抑制曲線，回歸方程為：I=29.292logC+111.07，R<'2>=0.9941，線性范圍為0.2～200mg/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=10.53％(n=5)，IC<,50>=8.3ng/mL，IC<,20>=0.8ng/mL。

4、在相同條件下，測定常用磺酰脲類除草劑對抗原抗體的交叉反應(yīng)性，結(jié)果顯示交叉反應(yīng)率<0.04％。 在空白土壤中分別添加磺?；锹?biāo)樣，使土壤中磺?；锹『糠謩e為：1μg/g、0.1μg/g、0.01μg/.g。添加土樣用水/乙腈=1/1提取，E-H直接競爭ELISA法測定，重復(fù)4次。土壤中磺?；锹?biāo)準(zhǔn)添加濃度為1μg/g水平時，ELISA測定的回收率82.3％～92.3％，RSD為3.47％；標(biāo)準(zhǔn)添加濃度為0.1μg/g水平時，ELI

5、SA測定的回收率99.8％～121.5％，RSD為9.80％；標(biāo)準(zhǔn)添加濃度為0.01μg/g水平時，ELISA測定的回收率102.3％～121.5％，RSD為7.78％。說明磺?；锹-H直接競爭ELISA法能滿足其殘留分析的要求。這為磺?；锹〉臍埩舴治鎏峁┝艘粋€新的分析技術(shù)。 成功建立了具鄰甲氧羰基苯磺酰脲共同結(jié)構(gòu)化合物的直接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析法。方陣試驗確定了抗體最佳包被濃度和酶標(biāo)半抗原(MSH-HRP)最佳稀釋度。在優(yōu)化