P2Y4受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá).pdf

1、在分子、細(xì)胞、系統(tǒng)水平的研究證實(shí)細(xì)胞外ATP通過作用于嘌呤能受體作為重要的信號分子參與眾多的生理和病理過程。P2Y受體是G蛋白藕聯(lián)受體，哺乳動物有8種亞型(P2Y1，2，4，6，11，12，13，14)，P2Y4受體在神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達(dá)，參與各種生理和病理功能，目前的研究主要集中在P2Y1受體，關(guān)于P2Y4受體的研究比較少。本研究擬系統(tǒng)研究P2Y4受體在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點(diǎn)，為深入研究其功能做基礎(chǔ)。
　　 本研究主要

2、采用免疫組織化學(xué)染色和原位雜交等技術(shù)研究P2Y4受體蛋白和mRNA在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)和分布特點(diǎn)。抗原吸附試驗后再進(jìn)行免疫染色，則無陽性結(jié)果；通過蛋白印跡實(shí)驗檢測大鼠大腦皮層提取物發(fā)現(xiàn)，在43kDa(約為P2Y4受體分子量大小)處呈現(xiàn)單一條帶，而抗血清吸附對照組中則檢測不到該條帶，說明我們所使用的P2Y4受體的多克隆抗體具有較高的特異性。我們使用大鼠cDNA片段(337-350)轉(zhuǎn)錄合成的地高辛標(biāo)記的反義探針進(jìn)行原位雜交實(shí)驗，得到陽

3、性結(jié)果，使用地高辛標(biāo)記的正義cRNA進(jìn)行原位雜交，在相應(yīng)區(qū)域則檢測不到陽性信號。這些實(shí)驗說明我們所使用的探針也具有較高的特異性。
　　 我們的實(shí)驗結(jié)果顯示P2Y4受體廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，且免疫組織化學(xué)染色結(jié)果和原位雜交結(jié)果具有高度一致性。
　　 在主嗅球、嗅前核、初級嗅皮層區(qū)域、均有P2Y4受體陽性染色，在這些區(qū)域的免疫染色主要集中在樹突和細(xì)胞胞體，證實(shí)突觸后膜ATP門控通道參與中樞嗅覺系統(tǒng)的快速興奮性嘌呤傳遞途徑

4、。
　　 P2Y4受體強(qiáng)陽性染色集中在大腦皮層初級運(yùn)動皮層，梨狀皮層，嗅皮層、無顆粒島葉皮層，提示P2Y4受體可能參與神經(jīng)局部環(huán)路的構(gòu)建。
　　 在海馬中，在CA3區(qū)錐體細(xì)胞的軸突和CAl區(qū)的錐體細(xì)胞形成突觸的區(qū)域呈現(xiàn)P2Y4受體強(qiáng)的陽性染色，提示該受體可能參與海馬的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)傳遞或調(diào)節(jié)Schaeffer側(cè)枝、苔蘚纖維和perforant通路。
　　 P2Y4受體廣泛分布在后腦比其它腦區(qū)呈現(xiàn)更強(qiáng)的陽性信號。P

5、2Y4受體強(qiáng)陽性染色分布在腦橋核、三叉神經(jīng)中腦核、三叉神經(jīng)運(yùn)動核、疑核、下橄欖核、舌下神經(jīng)核、迷走神經(jīng)背核。
　　 在小腦皮層中，蒲肯野細(xì)胞上P2Y4受體陽性染色最強(qiáng)，且所有的蒲肯野細(xì)胞均為陽性染色。致密染色集中在細(xì)胞胞體和樹突上，樹突中存在P2Y4受體同胞外ATP作為快速興奮性遞質(zhì)的作用相吻合。
　　 脊髓頸部、胸部、腰部、骶部灰質(zhì)區(qū)均呈P2Y4受體陽性染色。
　　 我們的研究發(fā)現(xiàn)P2Y4受體可以與VP(加壓素

6、)、OT(催產(chǎn)素)、Orexin(食欲素)共存，這些數(shù)據(jù)顯示嘌呤和嘧啶可能通過P2Y4受體調(diào)節(jié)神經(jīng)肽催產(chǎn)素、加壓素和食欲素的釋放。P2Y4受體和NR1受體共存，表明P2Y4受體可能和NR1受體耦聯(lián)調(diào)節(jié)神經(jīng)元的生理和病理功能。
　　 本課題聯(lián)合使用免疫組織化學(xué)和原位雜交技術(shù)首次系統(tǒng)研究了P2Y4受體蛋白和mRNA在小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)該受體廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元中。提示細(xì)胞外ATP可能也通過激活P2Y4