白及微球?qū)嶒?yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 白及多糖的提取與純化
　　目的:分離純化白及多糖。材料與方法:60℃熱水回流提取,Savage法脫蛋白,石油醚脫脂,活性碳脫色,陰離子交換纖維素柱(DE-52)和凝膠柱(Sephadex G-100)層析得白及多糖。結(jié)果:熱水提取的白芨多糖為乳白色無(wú)嗅無(wú)味粉末,經(jīng) DE-52柱和Sephadex G-100柱層析得均一組分,白及多糖的平均得率為(1.9+0.2)％。結(jié)論:該方法

2、簡(jiǎn)單方便、穩(wěn)定可行,提取的白及多糖可供制備白及微球。
　　第二部分 白及多糖的體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探討白及多糖的抗腫瘤作用。材料與方法:體外細(xì)胞培養(yǎng)的人胃癌細(xì)胞(sgc)、人卵巢癌細(xì)胞(A2780)和肝癌細(xì)胞(HepG2)經(jīng)不同劑量白及多糖處理后,應(yīng)用MTT法測(cè)定細(xì)胞的增殖情況,流式細(xì)胞儀測(cè)定白及多糖對(duì)三種腫瘤細(xì)胞周期的影響。結(jié)果:白及多糖對(duì)人胃癌細(xì)胞、人卵巢癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的增殖抑制作用具有時(shí)間及劑量依賴性。流式

3、細(xì)胞檢測(cè)顯示經(jīng)200ug/ml白及多糖作用72h后,人胃癌細(xì)胞 G0/G1期細(xì)胞增多, S期細(xì)胞無(wú)明顯變化,G2/M期細(xì)胞減少;人卵巢癌細(xì)胞 S期細(xì)胞增多,G2/M期細(xì)胞減少,G0/G1期細(xì)胞無(wú)明顯變化;肝癌細(xì)胞 G0/G1期細(xì)胞增多,S期細(xì)胞無(wú)明顯變化,G2/M期細(xì)胞減少。結(jié)論:白及多糖可通過(guò)抑制人胃癌細(xì)胞(sgc)、人卵巢癌細(xì)胞(A2780)和肝癌細(xì)胞(HepG2)的生長(zhǎng)增殖、細(xì)胞周期阻滯作用發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　第三部分 白

4、及微球的制備及其表征
　　目的:制備白及微球并觀察其表征。材料與方法:乳化-冷凝-化學(xué)交聯(lián)法制備空白白及微球,單因素及正交實(shí)驗(yàn)對(duì)制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。激光粒度儀測(cè)定微球大小,觀察微球分散性、懸浮性和沉降時(shí)間、吸水溶脹率、導(dǎo)管推注表現(xiàn)及溶解時(shí)間。結(jié)果:水、油相比和白及多糖濃度對(duì)微球粒徑及產(chǎn)率影響較大。微球在生理鹽水與造影劑歐乃派克中形成不穩(wěn)定懸液,分散性良好,沉降時(shí)間與粒徑成正比。微球在生理鹽水中溶脹速度快于造影劑中,不同 pH值時(shí)溶脹

5、率無(wú)明顯變化。微球較容易通過(guò)5F導(dǎo)管,但大于400um的微球吸水后難以通過(guò)3F微導(dǎo)管,約6周后微球完全融解。結(jié)論:改良法制備的白及微球符合栓塞劑的基本特征。
　　第四部分 白及微球的生物相容性實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:研究白及微球的生物相容性。材料與方法:行白及微球熱原試驗(yàn),MTT法觀察白及微球?qū)π∈蟪衫w維細(xì)胞、人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。觀察白及微球的血液相容性。評(píng)價(jià)白及微球種植于日本大白兔背部肌肉內(nèi)的組織炎癥反應(yīng)和栓塞日本

6、大白兔右腎動(dòng)脈后動(dòng)脈管壁變化。結(jié)果:白及微球?qū)κ蟪衫w維細(xì)胞、人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響,血液相容性良好,無(wú)溶血現(xiàn)象。大白兔肌肉植入部位大體觀察無(wú)異常,病理學(xué)檢測(cè)組織炎癥反應(yīng)程度低,栓塞日本大白兔腎動(dòng)脈后見腎血管管壁炎性反應(yīng)輕微,肝、腎功能較快恢復(fù)正常水平。結(jié)論:白及微球生物相容性良好,可作為中期栓塞劑應(yīng)用于臨床。
　　第五部分 白及微球?qū)θ毡敬蟀淄媚I動(dòng)脈栓塞的實(shí)驗(yàn)研究
　　白及微球栓塞日本大白兔腎動(dòng)脈的實(shí)驗(yàn)研究見我科

7、宋松林碩士畢業(yè)論文。
　　第六部分 白及微球?qū)ν?VX2移植性肝癌栓塞治療效果的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:評(píng)價(jià)白及微球?qū)ν?VX2移植性肝癌的栓塞治療效果。材料與方法:建立15只日本大白兔 VX2移植性肝癌模型,平均分為3組,A組經(jīng)肝動(dòng)脈灌注生理鹽水,B組經(jīng)肝動(dòng)脈注入超液態(tài)碘油+阿霉素,C組經(jīng)肝動(dòng)脈注入白及微球栓塞治療(200um)。術(shù)前及術(shù)后2w分別用MRI檢測(cè)腫瘤大小并計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)率;復(fù)查 DSA檢測(cè)栓塞維持時(shí)間、腫瘤血管有無(wú)

8、再通和側(cè)枝循環(huán)情況。病理學(xué)觀察組織形態(tài),栓塞劑分布;免疫組化染色檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡、凋亡相關(guān)因子 Bax、bcl-2及腫瘤血管細(xì)胞內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)。結(jié)果:兔 VX2移植性肝癌荷瘤兔術(shù)后2w腫瘤增長(zhǎng)率、凋亡率、凋亡相關(guān)因子 bax、bcl-2及VEGF組間兩兩比較 B、C組無(wú)明顯差異(P>0.05),B、C組與 A組差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2w后復(fù)查造影白及微球栓塞組腫瘤血管無(wú)再通,無(wú)側(cè)枝循環(huán)血管形成,腫瘤組織壞死并被

9、無(wú)結(jié)構(gòu)組織代替,腫瘤血管內(nèi)可發(fā)現(xiàn)白及微球。結(jié)論:白及微球使用方便、安全,栓塞血管效果良好,是一種理想的外周血管栓塞劑。白及微球?qū)ν肰X2移植性肝癌栓塞治療效果良好。
　　第七部分 白及微球?qū)θ毡敬蟀淄米訉m肌瘤栓塞治療的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探討建立日本大白兔子宮肌瘤動(dòng)物模型和白及微球經(jīng)動(dòng)脈栓塞治療日本大白兔子宮肌瘤模型的可行性。材料與方法:20只雌性日本大白兔,實(shí)驗(yàn)組15只采用雌孕激素聯(lián)合法誘導(dǎo)建立子宮肌瘤模型,5只后大腿肌肉

10、注射生理鹽水設(shè)為對(duì)照組。20周后實(shí)驗(yàn)組剩下10只實(shí)驗(yàn)兔,然后平均分成兩組,A組在雙側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈注入白及微球行栓塞治療(200um),B組在雙側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈注入PVAs(300um)設(shè)為對(duì)照組。介入栓塞術(shù)后第二天處死實(shí)驗(yàn)兔,病理學(xué)觀察組織形態(tài),栓塞劑分布,免疫組化染色檢測(cè)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)。結(jié)果:成功建立10只子宮肌瘤模型,造模成功率為66.7％。實(shí)驗(yàn)組大體觀子宮明顯腫脹、結(jié)節(jié)形成;鏡下觀察子宮平滑肌增生,細(xì)胞排列紊亂,平滑