基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑與NO在川崎病冠脈損害中表達(dá)的研究.pdf

1、目的:研究川崎病(KD)患兒急性期、恢復(fù)期血清基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑2(TIMP-2)及一氧化氮(NO)的表達(dá)水平,并探討KD急性期血清MMP-2、MMP-3、TIMP-1、TIMP-2與NO的相關(guān)性分析的研究,探討其表達(dá)在KD冠脈損害中的作用,從而為預(yù)防冠脈損害提供理論依據(jù)。
　　 方法:1.標(biāo)本采集:(1)研究組:30例川崎

2、病患兒,冠脈損害組(CML)15例,冠脈正常組(NCAL)15例,分別收集急性期(靜注IVIG前,病程第1-2周)、恢復(fù)期(靜注IVIG后,病程第3—4周)外周血制備血清。(2)對(duì)照組:分別抽取30例年齡相仿的發(fā)熱患兒(發(fā)熱對(duì)照組,F組)和30例年齡相仿的正常健康兒童(正常對(duì)照組,C組)外周血制備血清。
　　 2.指標(biāo)檢測(cè):用固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定各組患兒血清中MMP-2、MMP-3、TIMP-1、TIMP

3、-2的水平,用硝酸還原法檢測(cè)各組患兒血清中NO的水平。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差((X)±S)表示。方差齊用t檢驗(yàn),方差不齊用t’檢驗(yàn)；MMP-2／TIMP-2、MMP-3／TIMP-1比值用秩和檢驗(yàn)。血清MMPs、TIMPs等與NO的相關(guān)分析采用Pearson法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05(雙側(cè)),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1.MMP-2、TIMP-2、

4、MMP-2／TIMP-2
　　 (1)川崎病CAL組MMP-2水平(480.75±9.82μg／L)高于NCAL組(450.06±4.38μg／L),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；川崎病CAL組血清TIMP-2(393.61±3.89μg／L)、MMP-2／TIMP-2(1.57±0.21)水平與NCAL組TIMP-2(376.30±11.28μg／L)、MMP-2／TIMP-2(1.29±0.14)相比較明顯升高,差異有極

5、顯著意義(P均<0.01)。(2)KD急性期血清MMP-2(465.40±17.31μg／L)、TIMP-2(384.95±12.09μg／L)、MMP-2／TIMP-2(1.71±0.16)水平與發(fā)熱對(duì)照組MMP-2(311.26±15.81μg／L)、TIMP-2(264.05±12.35μg／L)、MMP-2／TIMP-2(1.05±0.19)和正常對(duì)照組MMP-2(295.02±18.18μg／L)、TIMP-2(253.46±

6、15.41μg／L)、MMP-2／TIMP-2(0.94±0.12)相比明顯升高(P均<0.01)。(3)KD恢復(fù)期血清MMP-2(422.51±16.13μg／L)、TIMP-2(338.83±14.93μg／L)與發(fā)熱對(duì)照組MMP-2(311.26±15.81μg／L)、TIMP-2(264.05±12.35μg／L)、正常對(duì)照組MMP-2(295.02±18.18μg／L)、TIMP-2(253.46±15.41μg／L)相比明顯

7、升高(P均<0.01),KD恢復(fù)期MMP-2／TIMP-2(1.29±0.12)與發(fā)熱對(duì)照組(1.05±0.19)和正常對(duì)照組(0.94±0.12)相比較明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)KD急性期血清MMP-2水平(465.40±17.31μg／L)與恢復(fù)期(422.51±16.13μg／L)相比較明顯升高(P<0.05),TIMP-2(384.95±12.09μg／L)、MMP-2／TIMP-2(1.71±0.16)

8、水平與恢復(fù)期TIMP-2(338.83±14.93μg／L)、MMP-2／TIMP-2(1.29±0.12)相比明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(5)發(fā)熱對(duì)照組MMP-2(311.26±15.81μg／L)、TIMP-2(264.05±12.35μg／L)、MMP-2／TIMP-2(1.05±0.19)和正常對(duì)照組MMP-2(295.02±18.18μg／L)、TIMP-2(253.46±15.41μg／L)、MMP-2／T

9、IMP-2(0.94±0.12)相比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2.MMP-3、TIMP-1、MMP-3／TIMP-1
　　 (1)川崎病CAL組血清MMP-3(58.38±9.43μg／L)和NCAL組血清水平(33.78±3.34μg／L)相比明顯升高,差異有極顯著意義(P<0.01)；血清TIMP-1水平(298.37±61.45μg／L)水平較NCAL組(357.16±.22.79μg／L)明顯降低

10、,差異有極顯著意義(P<0.01)；血清MMP-3／TIMP-1(0.45±0.15)和NCAL組(0.08±0.02)相比較明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)KD急性期MMP-3(46.07±14.31μg／L)、MMP-3／TIMP-1(0.14±0.06)、恢復(fù)期血清MMP-3(32.41±7.48μg／L)、MMP-3／TIMP-1(0.13±0.09)水平與發(fā)熱對(duì)照組MMP-3(31.96±4.11μg／L)、

11、MMP-3／TIMP-1(0.15±0.04)和正常對(duì)照組MMP-3(10.51±0.45μg／L)、MMP-3／TIMP-1(0.12±0.02)相比較均明顯升高(P均<0.01)。(3)KD急性期TIMP-1水平(328.93±45.17μg／L)、KD恢復(fù)期TIMP-1水平(281.61±39.42μg／L)與發(fā)熱對(duì)照組(247.64±16.73μg／L)和正常對(duì)照組(94.63±3.60μg／L)相比較,明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

12、義(P均<0.01)；而KD急性期TIMP-1水平(328.93±45.17μg／L)與KD恢復(fù)期TIMP-1(281.61±39.42μg／L)相比較,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(4)發(fā)熱對(duì)照組MMP-3(31.96±4.11μg／L)、TIMP-1(247.64±16.73μg／L)與正常對(duì)照組MMP-3(10.51±0.45μg／L)、TIMP-1(94.63±3.60μg／L)相比；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而

13、發(fā)熱對(duì)照組MMP-3／TIMP-1(0.15±0.04)和正常對(duì)照組MMP-3／TIMP-1(0.12±0.02)相比較,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.NO
　　 (1)川崎病CAL組NO水平(176±22μmol／L)明顯高于NCAL組(97±14μmol／L),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)KD急性期NO水平(137±44μmol／L)、恢復(fù)期(73±23μmol／L)與發(fā)熱對(duì)照組(44±

14、11μmol／L)、正常對(duì)照組(41±11μmol／L)相比較,明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。(3)KD急性期NO水平(137±44μmol／L)與恢復(fù)期(73±23μmol／L)相比較,明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(4)發(fā)熱對(duì)照組NO水平(44±11μmol／L)和正常對(duì)照組(41±11μmol／L)相比較沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。
　　 4.MMPs、TIMPs與NO的相關(guān)性分析:

15、　　 (1)血清MMP-2、MMP-3與NO之間呈顯著正相關(guān)(r=0.895,P<0.01:r=0.898,P<0.01)。(2)血清中TIMP-2、TIMP-1與NO之間呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.382,P<0.05:r=-0.772,P<0.01)。
　　 結(jié)論:1.KD冠脈損害組患兒血清MMP-2、TIMP-2、MMP-2／TIMP-2的水平明顯高于KD冠脈正常組,提示血清中MMP-2、TIMP-2、MMP-2／TIMP-

16、2可以做為川崎病冠脈損害的一個(gè)危險(xiǎn)因素,在KD血管壁的損傷以及冠狀動(dòng)脈瘤的形成中起著重要作用,KD急性期過(guò)后可能仍存在有MMP-2,TIMP-2升高,表明KD可能存在持久的冠狀動(dòng)脈損傷,因而對(duì)KD患兒需長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)血管損害情況。
　　 2.川崎病CAL組血清MMP-3和NCAL組相比明顯升高,提示MMP-3很可能參與了血管壁的損傷過(guò)程；可以做為預(yù)測(cè)與早期診斷CAL的客觀生化指標(biāo)。KD急性期MMP-3、TIMP-1、MMP-3／TIM

17、P-1水平明顯高于恢復(fù)期和對(duì)照組；提示MMP-3、TIMP-1、MMP-3／TIMP-1可作為早期診斷川崎病的一個(gè)客觀生化指標(biāo)。
　　 3.NO過(guò)度表達(dá)參與了KD急性期血管炎尤其是冠脈損害的發(fā)生發(fā)展,由此可以將循環(huán)中NO水平作為判斷KD冠脈損害的一個(gè)有效指標(biāo)。
　　 4.血清中MMP-2、MMP-3與NO之間呈顯著性正相關(guān),提示MMP-2、MMP-3與NO之間可能存在相互協(xié)同作用,共同促進(jìn)冠脈損害的發(fā)生和發(fā)展。血清中TI