筋脈通對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)和雪旺細(xì)胞形態(tài)學(xué)及核轉(zhuǎn)錄因子κB的影響.pdf

1、目的: 1、觀察筋脈通對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)病理形態(tài)以及NF—κB蛋白表達(dá)的影響。 2、觀察筋脈通含藥血清對高糖培養(yǎng)雪旺細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)以及NF—κB蛋白及其mRNA表達(dá)的影響。 方法: 1、在體實(shí)驗(yàn)： 采用鏈脲佐菌素(STZ，60mg/kg)一次性腹腔注射Wistar大鼠的方法造模，隨機(jī)分為模型對照(DM)組、筋脈通小劑量(J小)、中劑量(J中)和大劑量(J大)組及神經(jīng)妥樂平(Ntp)組，每組各10只

2、。以體重、鼠齡及性別相匹配的正常大鼠10只作為正常對照(Con)組。灌胃16w處死，檢測各組大鼠干預(yù)前及干預(yù)后4w、8w、12w和16w血糖和體重變化，通過光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察大鼠坐骨神經(jīng)病理改變并行形態(tài)測量學(xué)分析，免疫組織化學(xué)染色法測定坐骨神經(jīng)NF—κB蛋白的表達(dá)。 2、離體實(shí)驗(yàn)： 從Wistar乳鼠坐骨神經(jīng)取材，原代培養(yǎng)并純化雪旺細(xì)胞，S—100蛋白免疫組織化學(xué)法進(jìn)行鑒定。取第3代雪旺細(xì)胞，加入不同條件培養(yǎng)

3、基，分為正常對照(Con)組、高糖(Glu)組、筋脈通(JMT)組和神經(jīng)妥樂平(Ntp)組進(jìn)行培養(yǎng)，48h后行透射電子顯微鏡觀察雪旺細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，采用激光掃描共聚焦顯微技術(shù)檢測NF—κB蛋白表達(dá)水平的變化，實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測雪旺細(xì)胞NF—κB mRNA的表達(dá)。 結(jié)果: 1、在體實(shí)驗(yàn)： (1)血糖體重： 糖尿病大鼠血糖值均顯著高于Con組(P<0.01)，各治療組血糖在各時間點(diǎn)與DM組相比無明顯差異

4、(P>0.05)；治療組間血糖在各時間點(diǎn)均無明顯差異(P>0.05)；干預(yù)前后，相同時間點(diǎn)各組大鼠之間的體重?zé)o明顯差異(P>0.05)。 (2)病理形態(tài)： ①形態(tài)學(xué)觀察：Con組大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)正常，排列整齊，軸索、髓鞘及雪旺細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整清晰。DM組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)減少，排列紊亂，軸索腫脹或皺縮，髓鞘密度不均勻，部分神經(jīng)髓鞘脫失，雪旺細(xì)胞變性，間質(zhì)膠原纖維增多，血管基底膜增厚。各治療組大鼠坐骨神經(jīng)病變程度較DM組減輕

5、。 ②形態(tài)測量學(xué)分析：與Con組相比DM組大鼠有髓神經(jīng)纖維密度、小纖維密度減少，小纖維比率下降，有髓神經(jīng)纖維平均橫截面積、軸索平均橫截面積增大，差異顯著(P<0.01)；大纖維密度和髓鞘平均橫截面積在各組動物間比較無明顯差異(P>0.05)。與DM組比較，各治療組上述各值均有改善，其中J中組改善顯著(P<0.05)。各治療組間比較，J大組較J中組有髓神經(jīng)纖維密度、小纖維比率下降，軸索平均橫截面積增大，差異顯著(P<0.05，P<

6、0.01)。 (3)坐骨神經(jīng)NF—κB蛋白的表達(dá)： NF—xB主要表達(dá)于雪旺細(xì)胞漿及細(xì)胞核、部分軸索和血管內(nèi)皮細(xì)胞中，髓鞘表達(dá)較弱。與Con組相比，DM組的陽性區(qū)域平均面積、積分光密度及平均光密度值顯著升高(P<0.01)。各治療組上述各值均較DM組降低，其中J中組差異顯著(P<0.05)。J小組平均光密度值較J中組顯著升高(P<0.01)；其余各值在各治療組間比較無明顯差異(P>0.05)。 2、離體實(shí)驗(yàn)：

7、 (1)超微結(jié)構(gòu)： Con組雪旺細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，無基底膜包被。Glu組部分細(xì)胞無細(xì)胞核、剩余細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞器較少，糖原、脂滴和空泡變性多見；另有一些細(xì)胞呈氣球樣改變，細(xì)胞膜不完整。JMT組細(xì)胞病理改變較Glu組稍有減輕。Ntp組細(xì)胞形態(tài)異常較Glu組改善不明顯。 (2)SC中NF—κB蛋白的表達(dá)： Con組NF—κB綠色熒光強(qiáng)度較弱，主要表達(dá)于胞漿區(qū)；Glu組熒光強(qiáng)度于胞漿區(qū)和胞核區(qū)表達(dá)都較Con組增強(qiáng)

8、；JMT組和Ntp組表達(dá)都較Glu組減弱，主要表達(dá)于胞漿區(qū)。與Con組相比，Glu組NF—κB的熒光強(qiáng)度值顯著升高(P<0.01)。JMT組和Ntp組均較Glu組顯著降低(P<0.01)。兩治療組間比較無明顯差異(P>0.05)。 (3)SC中NF—κB mRNA的表達(dá)： 與Con組相比，Glu組及各治療組NF—κB mRNA值均顯著升高(P<0.01)。與Glu組相比，JMT組和Ntp組的NF—κB mRNA值均顯著下

9、降(P<0.01)。兩治療組間比較無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論: 1、在體實(shí)驗(yàn)： 空腹單次腹腔注射STZ(60mg/kg)16w，糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)可出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)的病理改變，包括軸索、髓鞘病變等主質(zhì)成分病變和血管、膠原纖維等間質(zhì)成分病變，存在有髓神經(jīng)纖維缺失現(xiàn)象。坐骨神經(jīng)組織中NF—κB表達(dá)水平顯著升高。筋脈通可改善糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)病理形態(tài)、減少坐骨神經(jīng)中NF—κB的表達(dá)，中劑量組效果最好。 2、