PCBP2在大鼠坐骨神經(jīng)損傷后的時空表達(dá)變化對雪旺細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　研究 PCBP2在大鼠坐骨神經(jīng)損傷過程中的表達(dá)變化、作用，分析 PCBP2與雪旺細(xì)胞增殖之間的關(guān)系，探討 PCBP2在周圍神經(jīng)損傷和修復(fù)過程中的作用機(jī)制，也為周圍神經(jīng)損傷的治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.選用健康成年雄性SD大鼠（220-275 g左右）54只，構(gòu)建大鼠坐骨神經(jīng)夾傷模型，根據(jù)損傷時間的不同，將大鼠隨機(jī)分為9組：正常組（假手術(shù)組）、6h、12h、1d、3d、5d、1w、2w和4w。每組6只

2、，其中3只用于組織切片，3只用于提取神經(jīng)組織蛋白，運用Western Blot方法測定不同損傷時間點PCBP2的表達(dá)變化，初步確定PCBP2的表達(dá)在周圍神經(jīng)損傷后的變化趨勢。
　　2.通過免疫組化的方法觀察 PCBP2在周圍神經(jīng)損傷后相應(yīng)組織中的表達(dá)情況，通過免疫熒光雙標(biāo)方法分析 PCBP2在坐骨神經(jīng)中的分布和細(xì)胞定位。
　　3.篩選PCBP2干擾的雪旺細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株，在穩(wěn)轉(zhuǎn)株中驗證干擾 PCBP2后是否會影響FHL3、p21信

3、號的表達(dá)。運用流式細(xì)胞技術(shù)及CCK-8分析干擾PCBP2后對雪旺細(xì)胞增殖周期的影響。
　　結(jié)果：
　　1. Western bolt結(jié)果顯示PCBP2蛋白水平在神經(jīng)損傷后3d開始上調(diào)，在7d達(dá)到高峰，在損傷后4w恢復(fù)到正常水平。
　　2.免疫組化結(jié)果表明坐骨神經(jīng)夾傷后，神經(jīng)組織中的 PCBP2陽性率增強(qiáng)；免疫熒光雙標(biāo)分析表明在坐骨神經(jīng)夾傷后，PCBP2主要表達(dá)于 S100標(biāo)記的雪旺細(xì)胞中，與 NF200標(biāo)記的軸突沒有共

4、定位。此外，PCBP2與雪旺細(xì)胞增殖標(biāo)記物PCNA也有共定位。
　　3. TNF-α誘導(dǎo)的雪旺細(xì)胞增殖模型中，PCBP2的表達(dá)逐漸增加，與細(xì)胞增殖標(biāo)記物PCNA的表達(dá)趨勢一致，但FHL3及p21的表達(dá)逐漸降低。流式細(xì)胞分析技術(shù)及CCK-8結(jié)果表明：干預(yù)PCBP2的表達(dá)能抑制雪旺細(xì)胞的增殖。
　　4．雪旺細(xì)胞中干預(yù)PCBP2的表達(dá)后，F(xiàn)HL3及p21的表達(dá)增加，同時干預(yù)FHL3的表達(dá)后，p21的表達(dá)減少，并且免疫熒光雙標(biāo)實驗表