Immunogenicity of recombinant rabies virus expressing two copies of glycoprotein as inactivated rabies vaccine.pdf

1、狂犬病由狂犬病病毒(RABV)引起的一種古老的人畜共患傳染病，大約有5000多年的歷史。據(jù)估計(jì)，每年全世界死于狂犬病的人數(shù)大約有55000人，而這些病例主要發(fā)生在非洲和亞洲一些發(fā)展中國(guó)家，這些國(guó)家共有的特點(diǎn)是其犬狂犬病都比較流行。據(jù)統(tǒng)計(jì)，這些國(guó)家的人感染狂犬病的案例中95％都是由犬咬傷導(dǎo)致的，因此，大范圍的對(duì)犬進(jìn)行免疫是控制狂犬病的關(guān)鍵。當(dāng)前，用于家養(yǎng)動(dòng)物（主要是犬和貓）的狂犬病免疫主要是安全性較高的滅活疫苗。但是，這些滅活疫苗免疫后誘

2、導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)較低，而且一般均需要多次免疫才能使機(jī)體產(chǎn)生相對(duì)較高的抗體水平。因此，研發(fā)價(jià)格便宜、更加有效的狂犬病疫苗對(duì)當(dāng)前狂犬病的防控起到重要的作用。
　　G蛋白是狂犬病病毒的主要免疫原原性蛋白，其可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗病毒中和抗體，從而來(lái)抑制病毒感染。前期研究表明將一個(gè)或者兩個(gè)G蛋白插入到病毒G和L之間，通過(guò)反向遺傳操作技術(shù)拯救出過(guò)量表達(dá)G蛋白的重組狂犬病病毒，可以顯著增強(qiáng)其誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗病毒中和抗體(VNA)的水平，并且提供

3、更好的免疫保護(hù)。在本研究中，我們將G蛋白分別插入到母本病毒LBNSE的基因組的G和L以及P和M之間，利用反向遺傳操作技術(shù)拯救出兩個(gè)重組病毒，分別命名為L(zhǎng)BNSE-GL-G和LBNSE-PM-G。將拯救的兩株重組狂犬病病毒在BSR細(xì)胞上進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的測(cè)定，并與母本毒株LBNSE進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩株病毒在BSR細(xì)胞上的生長(zhǎng)曲線與母本毒株相似。此外，還進(jìn)行了重組病毒感染細(xì)胞后的G蛋白表達(dá)量檢測(cè)以及兩株重組病毒誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的情況檢測(cè)，結(jié)果表明與母

4、本毒株LBNSE和LBNSE-GL-G相比，LBNSE-PM-G在感染細(xì)胞后可以表達(dá)更多的G蛋白，與細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。然而，當(dāng)將兩個(gè)重組病毒利用密度梯度離心法進(jìn)行純化后再進(jìn)行G蛋白的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在LBNSE-PM-G病毒粒子表面的G蛋白量要少于LBNSE-GL-G病毒粒子的G蛋白表達(dá)量，這表明LBNSE-PM-G在病毒組裝過(guò)程中并沒(méi)有把過(guò)量表達(dá)的G蛋白嵌入到病毒粒子中。在進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也得到驗(yàn)證，將滅活的兩株重組病毒以及母本病

5、毒進(jìn)行小鼠免疫實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)免疫LBNSE-PM-G的小鼠產(chǎn)生的VNA水平與母本毒株LBNSE相當(dāng)，均顯著低于LBNSE-GL-G免疫的小鼠產(chǎn)生的VNA水平。在用CVS-24進(jìn)行小鼠攻毒實(shí)驗(yàn)后，結(jié)果也與VNA的產(chǎn)生水平相符合?？傊狙芯康慕Y(jié)果表明，把G蛋白插入到病毒P和M基因之間構(gòu)建過(guò)表達(dá)G蛋白的重組病毒時(shí)，過(guò)量表達(dá)的G蛋白可能由于M蛋白的表達(dá)受到影響而并沒(méi)有被嵌入到病毒粒子中，因此當(dāng)其作為滅活疫苗使用時(shí)，并不能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生更高水平的VN