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1、浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院碩士學(xué)位論文Rubisco活化酶與水稻耐旱性的關(guān)系姓名:楊萬軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):植物學(xué)指導(dǎo)教師:蔣德安20080610浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文英文摘要RelationshipbetweenRubiscoActivaseandDroughtToleranceinRice(Oryzasativa)Ribulosel。5bisphosphatecarboxylase/oxygenase(Rubisco)catalyzes
2、thefirststepofboththephotosyntheticcarbonassimilationandphotorespiratorycarbonoxidationandisakeyregulatoryenzymeofphotosynthesisThecatalyticsitesofRubsiconeedtobeactivatedbythecarbamylationofalysineresiduewiththesitesfol
3、lwedbybindingofmagnesiumInthisexperimenttherelationshipbetweentheantisensemutantricereducedinRubiscoactivase(RCA)anddroughttoleranceWasconducted,andadditionallytheoverexpressionricewithlargeorsmallisoformofrcahasbeenobta
4、inedwithgenetransformationTheresultsareasfollows:Theantisensercaplantsanditswildtype(OryzaSativaLsspjaponica)wereusedforstudyingtheeffectsofdroughtonthegasexchangeparameters,chlorophyllfluorescenceparameters,chlorophyllc
5、ontent,RubiscoactivityRubiscocontentandRCAcontentinthemTheresultsshowedthatphotosynthesisWassuppressedtoamoredegreeinantisense腳plantsthaninwildtype,anditwasmainlyduetothenon—stomatallimitationTheRubiscoactivityRubiscocon
6、tent,chlorophyllcontentF/Fm’and①PSⅡdecreasedatahigherspeedinantisensercaplantsthaninthewildtypeAllthosedidnofavorfornormaloperationofCalvinCycleandPSⅡactivityThelargeisoformandsmallisoformmRNAofRubiscoActivase(RCA)gene(r
7、ca)wereamplifiedusingspecificprimersandinsertedintopUCmTvectorandthencutwithHindlll/BamHIafterconfirmedbysequencingThefragmentswereinsertedintothebinaryexpressionvectorpCAMBIA1390一ubi,andtheresultingconstructionwithovere
8、xpressionrcawerenamedpCl390I(RCAI)andpCl390II(RCAⅡ)ThepCl390landpCl390IIvectorwereintroducedintoAgrobacteriumtumefaciensstrainEHA105byelectroporationandtransformedtoembryosofrice(OryzasativaLsspjaponica)cultivarZhonghual
9、lviaAgrobacteriumtumefacienssystemPlantletswereregeneratedinvitrobyresistanceselectiononmediumcontainingvariousconcentrationsofhygromycinBothGUShistochemicalassaysandPCRamplificationdemonstratedthatantisense/cawasintegra
10、tedintoTOgenomesandinheritedtoT1TheresultofRCAcontentmeasurementshowedthattheoverexpressionplantsincreasedapproximately30%ofthewildtypelevelTlliShassetabaseforuncoveringthefunctionofRCAintoleranceofplanttodroughtstressKe
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