三種中藥有效成分與DNA相互作用的研究.pdf

1、小分子化合物與生物大分子相互作用的研究已經(jīng)成為了化學生物學中重要的研究課題。DNA是生物體中重要的一類生物大分子，對生命密碼的翻譯、轉錄、復制起著非常重要的作用，一方面，DNA靶向化合物成為很重要的核酸探針選擇對象；另一方面，臨床上使用的許多抗癌藥物都以DNA為作用靶點。為了進一步探索和認識DNA的性質(zhì)、結構、行為、形態(tài)，揭開生命的奧秘，人們研究了大量小分子與DNA之間的相互作用，并且許多小分子現(xiàn)已成功地用作DNA足跡試劑，定位堿基錯配

2、試劑，以及結構探針，而且有助于從分子水平上了解抗癌藥物的作用機理，為設計臨床上更為有效的抗癌藥物提供理論指導。本文在此基礎上主要采用熒光光譜、紫外可見吸收光譜以及粘度等方法研究了抗病毒藥物冰片、丁香酚及大黃素與DNA的相互作用。 本論文主要由以下三部分組成：1冰片與DNA的相互作用研究利用共振光散射、紫外可見吸收光譜以及粘度法研究了冰片與DNA的相互作用。發(fā)現(xiàn)在接近人體生理的條件(pH7.40，溫度37℃)下，冰片與DNA反應較

3、迅速，并且反應體系至少于12小時內(nèi)穩(wěn)定。這可能是多種抗菌及抗炎中藥的配方中均含有冰片的原因之一。通過改變反應體系的離子強度、pH值及試劑加入的順序，發(fā)現(xiàn)反應體系對離子強度及溶液的pH值具有較強的敏感性，而試劑加入的順序對反應影響不明顯。共振光散射光譜顯示：冰片的加入使緩沖溶液--DNA體系在410、470nm處的共振光散射信號增強，說明冰片與DNA發(fā)生了相互作用。紫外可見吸收光譜的研究表明，冰片導致緩沖溶液--DNA體系在260nm處發(fā)

4、生增色效應，并產(chǎn)生4.0nm的紅移，證明了冰片是以嵌入方式與DNA發(fā)生作用的。同時通過EB(溴化乙錠)熒光探針競爭實驗和粘度實驗發(fā)現(xiàn)：冰片使EB-DNA體系的熒光強度降低，DNA的粘度減小，證明冰片與DNA的作用為嵌插模式，但不能完全嵌入，屬于部分嵌插模式。 2丁香酚與DNA的相互作用研究本章利用共振光散射的方法研究了丁香酚與DNA的相互作用。發(fā)現(xiàn)丁香酚在pH7.40及低離子強度0.0035mol/L條件下，室溫即與DNA發(fā)生反

5、應，共振光散射峰出現(xiàn)在420，455，470nm處。結果表明，丁香酚在DNA表面進行了長距組裝，導致散射光強度急劇增強，且散射光強度與加入DNA的濃度呈線性關系。另外紫外可見吸收光譜在255nm和317nm處出現(xiàn)等吸收點，說明丁香酚與DNA發(fā)生相互作用，形成了復合物，干擾病毒DNA的復制。反應進行平穩(wěn)，且反應完成后體系的共振光散射信號于24小時內(nèi)穩(wěn)定。同時探討了反應的影響因素，優(yōu)化了兩者的反應條件。作為一種抑菌系數(shù)較高的中藥成分，丁香酚

6、與DNA的作用較冰片更容易，反應體系更穩(wěn)定，作用更持久。 3.大黃素與DNA的相互作用研究本章利用分子熒光光譜法、紫外可見吸收光譜法、粘度法以及與EB的競爭性實驗，考察了大黃素與DNA的作用模式。結果表明：在pH7.40，低離子強度0.03mol/L及恒溫37℃條件下反應35分鐘，大黃素與DNA發(fā)生相互作用，各種光譜信號發(fā)生變化。體系在520nm處的熒光強度隨加入DNA的濃度增加呈遞減趨勢，紫外可見吸收光譜在380nm和475n