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1、該研究旨在用親和層析法分離純化出MBL分子,并測(cè)定其與單糖配體以及與兒童臨床上常見細(xì)菌的結(jié)合活性,探討其在兒童天然免疫中的作用.方法:將甘露聚糖與溴化氰活化的Sepharose 4B偶聯(lián),制成親和柱基質(zhì)——甘露聚糖-Sepharose 4B.將羊血清或人血漿過(guò)親和柱,在鈣離子存在的條件下,MBL分子可與柱上的甘露聚糖結(jié)合.用EDTA通過(guò)螯合鈣離子,從親和柱上洗脫MBL,從而分離純化出MBL.用還原性10﹪SDS-PAGE測(cè)定羊及人MBL
2、分子單體的分子量.羊血清MBL經(jīng)膠原酶消化后,將其產(chǎn)物行還原性10﹪SDS-PAGE,觀察MBL分子量的變化.用酶聯(lián)凝集素試驗(yàn)測(cè)定羊血清MBL與單糖配體及與常見細(xì)菌的結(jié)合活性.結(jié)論:用甘露聚糖-Sepharose 4B親和柱行親和層析能從哺乳動(dòng)物血清(血漿)中分離純化出有活性的MBL分子,人血漿MBL單體的分子量是30kD,羊血清MBL單體有兩種,分子量分別為29kD和33kD.羊血清MBL分子與其它哺乳動(dòng)物的MBL分子一樣,也具有膠原
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