家蠅蛹凝集素的純化及其免疫活性研究.pdf

1、家蠅作為一種重要的昆蟲資源，從幼蟲到成蟲都生活在充滿雜菌的環(huán)境里，傳播著病菌但其自身卻很少感染。研究表明，家蠅體內(nèi)存在很多具有生物活性的蛋白或多肽。如今從家蠅蛹中分離純化得到的凝集素，已被證實(shí)能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。然而，關(guān)于家蠅蛹甘露糖凝集素的免疫活性研究的報(bào)道卻很少。
　　本實(shí)驗(yàn)通過ConA-Sepharose4B親和層析和DEAESepharoseF.F離子交換層析，從家蠅蛹中分離純化得到一種免疫活性較高的甘露糖凝集素(MBL

2、-1)。SDS-PAGE電泳、糖染色和高效液相色譜的結(jié)果表明，MBL-1是分子量約為24kDa的單體糖蛋白。通過掃描電鏡顯示，MBL-1能使小鼠腹腔巨噬細(xì)胞呈明顯活化狀態(tài)，通過AO染色及PAS染色結(jié)果觀察，MBL-1能提高巨噬細(xì)胞核酸的代謝能力及糖原的分泌能力。以上結(jié)果證明，MBL-1能使小鼠腹腔巨噬細(xì)胞呈活化狀態(tài)。
　　通過免疫熒光染色及免疫印記實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:MBL-1能使巨噬細(xì)胞胞漿中的IκB-α降解，并使胞核中NF-κB蛋白

3、增加，且可增加細(xì)胞膜受體Notch1及TRL4表達(dá)，再綜合RT-PCR結(jié)果說明，MBL-1能增加細(xì)胞膜受體Notch1、TRL4表達(dá)及調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞NF-κB的活性，影響巨噬細(xì)胞IL-6、TNF-α和IL-12免疫因子在mRNA水平上的表達(dá)，進(jìn)而對巨噬細(xì)胞的免疫活性進(jìn)行調(diào)節(jié)。
　　通過建立環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠模型并以MBL-1灌胃，來研究MBL-1體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)作用，包括其對免疫低下小鼠的臟器指數(shù)，巨噬細(xì)胞吞噬能力，脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化

4、能力，NK細(xì)胞殺傷活性及脾臟細(xì)胞因子mRNA水平上表達(dá)的影響。結(jié)果表明，MBL-1的中、高劑量組的脾臟、胸腺指數(shù)顯著提高，同時(shí)，MBL-1也能提高脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活性及NK細(xì)胞殺傷活性。RT-PCR結(jié)果表明，MBL-1能修復(fù)環(huán)磷酰胺對小鼠脾臟IL-6、IL-12及IFN-γ三種細(xì)胞免疫因子造成的mRNA水平上表達(dá)的降低。以上體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均表明，MBL-1能顯著提高機(jī)體的免疫活性，也為開發(fā)新型免疫調(diào)節(jié)劑提供理論依據(jù)。