中藥有效成分對CaCCs通道調(diào)節(jié)功能的研究.pdf

1、鈣激活氯通道（CaCCs）廣泛存在于各種生物體內(nèi)，參與包括跨上皮細胞離子的轉(zhuǎn)運、嗅覺的傳導、平滑肌的收縮、痛覺的感受、視覺信號的轉(zhuǎn)化、控制神經(jīng)元的興奮等多種生理活動。CaCCs發(fā)生異常會導致如高血壓、干燥綜合征、氣道高反應、肺囊性纖維化等疾病，并與多種腫瘤的演化發(fā)展有關，已成為重要的藥物靶點。國內(nèi)外多項研究確定了TMEM16A/B是CaCCs的分子基礎，緩解乃至于治療CaCCs相關疾病，都需要尋找調(diào)節(jié)通道活性的物質(zhì)。中醫(yī)理論與中藥在中華

2、民族千年發(fā)展歷程中的實踐經(jīng)驗是民族智慧與艱苦實踐的結(jié)晶，蘊含著豐富的科學內(nèi)涵。從中藥有效成分中尋找CaCCs的靶向藥物，不僅能夠節(jié)省遴選時間，還能豐富中藥科學內(nèi)容，促進中醫(yī)藥學的現(xiàn)代化。本研究主要采用膜片鉗電生理技術和熒光顯微成像技術對中藥有效成分進行篩選，以期找到天然產(chǎn)物中的CaCCs靶向藥物。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過查閱治療相關疾病的中藥典籍，確定了東莨菪內(nèi)酯、水蘇堿、白藜蘆醇、大黃酸、芍藥苷、槲皮素、罌粟堿、黃連素等

3、多種中藥有效成分作為候選藥物，通過黃色熒光（EYFP）的篩選，初步確定了白藜蘆醇和大黃素對TMEM16A離子通道具有調(diào)節(jié)作用。⑵為了明確白藜蘆醇和大黃素是否可以升高胞內(nèi)鈣離子濃度，我們采用Ca2+染料Fluo-3 AM測定給藥前后HEK-293細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。實驗結(jié)果表明了白藜蘆醇對細胞內(nèi)Ca2+沒有影響，而大黃素能夠促使細胞內(nèi)鈣濃度升高，有趣的是，大黃素還抑制了ATP升高胞內(nèi)鈣的活動。⑶為了進一步檢驗白藜蘆醇和大黃素是否可以直

4、接激活 TMEM16A通道，我們采用膜片鉗內(nèi)面向外模式，研究結(jié)果顯示白藜蘆醇可以使通道電流變大，但大黃素對通道電流無影響。結(jié)合共聚焦與熒光實驗證據(jù)，得出以下結(jié)論：白藜蘆醇能夠直接與TMEM16A/B通道相互作用，激活通道；大黃素是通過升高胞內(nèi)鈣離子濃度而間接激活TMEM16A通道的。⑷在器官水平，白藜蘆醇能夠激活回腸上的TMEM16A通道促進腸道肌肉收縮，并且這種活動能夠被CaCC通道抑制劑CaCCinh-A01所抑制。⑸為了探究白藜蘆