銀杏葉提取物誘導(dǎo)HO-1表達(dá)抗大鼠動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究.pdf

1、目的:探討應(yīng)用銀杏葉提取物(Extract of Ginkgo Biloba,EGB)能否誘導(dǎo)大鼠主動(dòng)脈安全、持久地表達(dá)血紅素氧合酶-1(HemeOxygenase-1,HO-1)以及誘導(dǎo)HO-1表達(dá)能否有效發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)作用。方法:選用3月齡雄性Wistar大鼠46只,隨機(jī)分為普通對照組(A組)、單純高脂飼料組(B組)、EGB組(C組)、鋅原卟啉(Zinc protoporphyrinⅨ,Z

2、nPPⅨ)組(D組)及EGB加ZnPPⅨ組(E組)共5組,B組大鼠14只,余每組各8只,實(shí)驗(yàn)時(shí)間為14周。步驟分為:1.建立AS模型。A組給予普通飼料喂養(yǎng),其余四組給予高脂飼料喂養(yǎng),各組大鼠均于實(shí)驗(yàn)開始時(shí)一次性給予腹腔注射維生素D注射液70萬U/kg。B組大鼠分別于6周末、10周末及14周末隨機(jī)選取2只處死,取降主動(dòng)脈起始段1-2厘米送病檢,追蹤了解AS形成狀況。2.藥物干預(yù)對HO-1蛋白表達(dá)及HO-1活力的影響。于建立AS模型初始即開

3、始藥物干預(yù),其中C組給予EGB30mg/kg隔日腹腔注射一次；D組給予ZnPPⅨ7.5mg/kg隔日腹腔注射一次,E組給予EGB30mg/kg+ZnPPⅨ7.5mg/kg隔日腹腔注射一次,而A、B兩組則僅給予等量生理鹽水隔日腹腔注射一次。14周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束,處死大鼠,取降主動(dòng)脈起始段一部分行免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)檢查以了解細(xì)胞內(nèi)HO-1表達(dá)及分布情況,在200倍光鏡下見細(xì)胞胞漿內(nèi)有棕褐色顆粒樣產(chǎn)物的即

4、為HO-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞,計(jì)數(shù)全部有核細(xì)胞,計(jì)算陽性細(xì)胞的百分率。另取一部分主動(dòng)脈組織用作勻漿測定HO-1活力。根據(jù)HO-1降解血紅素生成膽紅素的原理,通過測定反應(yīng)體系中膽紅素的生成量來代表HO-1活力。比較各組間HO-1蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞及HO-1活力差異。3.誘導(dǎo)及抑制HO-1表達(dá)對AS的影響及相關(guān)機(jī)制研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),分別取各組大鼠降主動(dòng)脈起始段部分,剔除外膜結(jié)締組織后置入10％中性緩沖甲醛液中固定,常規(guī)石蠟切片及蘇木素伊紅(He

5、matoxylin andEosin,HE)染色,光鏡下觀察主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)、泡沫細(xì)胞及內(nèi)膜、中膜變化。于多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)測量內(nèi)膜、中膜厚度及其比值和斑塊面積。比較不同干預(yù)措施對AS的影響。4.生化指標(biāo)的檢測。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死大鼠時(shí),隨即經(jīng)心臟采血行肝功能、腎功能、血脂、高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-C-Reactive Protein,hs-CRP)、單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)、氧化低密度脂蛋白(oxidiz

6、ed Low DensityLipoprotein,ox-LDL)等檢測,比較不同處理方法下各項(xiàng)生化指標(biāo)的變化情況。結(jié)合肝、腎功能,評價(jià)EGB長期應(yīng)用的安全性。結(jié)果:1.大鼠AS模型成功建立:與A組比較,14周末時(shí)病理切片見B組主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚,向管腔突出,內(nèi)膜下可見大量泡沫細(xì)胞聚集；中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂、極性消失,內(nèi)膜與中膜厚度比值明顯增加(P<0.05)。2.與B、D、E組相比,C組HO-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞率明顯增加,HO-1活

7、力顯著升高,AS程度則顯著減輕；D組HO-1蛋白表達(dá)明顯降低,HO-1活力尤其低下,其AS程度則在各組中最明顯；E組HO-1蛋白表達(dá)及活力與D組相似(P>0.05),其AS程度較D組稍輕而與B組相似(P>0.05)。3.各組間血脂、hs-CRP、MCP-1及ox-LDL均差別顯著,其中應(yīng)用ZnPPⅨ的D、E兩組各指標(biāo)顯著高于B組(均為P<0.05)；而應(yīng)用EGB的C組以上指標(biāo)則明顯低于B組(均為P<0.05)。4.各組大鼠肝、腎功能未見