MazF基因治療獼猴艾滋病模型的實驗研究.pdf

1、SHIV病毒感染艾滋病動物模型是目前國外艾滋病模型研究的趨勢，被認為是比現(xiàn)階段普遍應(yīng)用的SIV模型針對性更強、更有意義的動物模型。國內(nèi)也已開始SHIV病毒感染艾滋病動物模型的研究，本研究以SHIV—KB9(以SIVmac239病毒基因組和HIVB亞型env、tat、rev和vpu基因為主體構(gòu)建的一株SHIV病毒)感染已導入MazF基因和未導入MazF基因的中國獼猴，進行了包括臨床表現(xiàn)、病毒血癥、免疫學和基因拷貝數(shù)等方面研究。 本

2、研究共選用了9只中國獼猴，實驗前經(jīng)血清學間接免疫熒光抗體檢查法(IFA)檢查排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴T淋巴細胞性Ⅰ型病毒(STLV—1)和猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV—1、2、5)的感染和B病毒感染。分三組進行，空白對照組1只(只進行SHIV—KB9病毒攻擊)，編號T—bc，實驗對照組2只(未導入基因)，編號KUCD4+T01(T01)和KUCD4+T02(T02)；實驗組6只(導入基因)，編號T—Mar、T—Jun、KUCD4+T

3、03(T03)、KUCD4+T04(T04)、 KUCD4+T05(T05)和KUCD4+T06(T06)，T—Mar和T—Jun動物進行了基因?qū)胛从肧HIV—KB9病毒攻擊。采用體外循環(huán)采集獼猴外周血PBMC和直接抽取獼猴外周血75mL分離PBMC，再進行CD4+T細胞分離培養(yǎng)并導入基因，培養(yǎng)結(jié)束后收獲細胞靜脈回輸猴體后再進行SHIV—KB9病毒感染。分別在感染前和感染后第0、3、8、11、14、17、21、24、28、35、49、

4、56、63、70、84、98天用EDTA抗凝管采集猴靜脈血3mL，取100ul抗凝血進行血常規(guī)分析，其余抗凝血離心分離血漿用于病毒載量檢測，以監(jiān)測SHIV—KB9在猴體內(nèi)的復(fù)制；分離PBMC用于CD4+/CD8+值測定，以監(jiān)測SHIV—KB9感染實驗猴后體內(nèi)免疫損傷情況。實驗結(jié)果顯示導入基因和回輸細胞的實驗獼猴其血漿病毒載量峰值都與已報道的推遲2周左右出現(xiàn)，比空白對照組推遲11天出現(xiàn)，其血漿病毒載量峰值比空白對照組峰值低約100倍，流式