人類卵母細(xì)胞經(jīng)慢速冷凍保存后紡錘體形態(tài)變化的研究.pdf

1、背景：冷凍卵子技術(shù)到目前為止仍然無法常規(guī)應(yīng)用于臨床，紡錘體對溫度降低的敏感性是冷凍MII期卵母細(xì)胞所面臨的主要困難之一。 方法：由促排卵方案得來的MII期卵母細(xì)胞用1.5M 1.2-丙二醇+0.3M蔗糖作為冷凍保護(hù)劑進(jìn)行慢速冷凍一快速融解后，每個患者來源的成活卵母細(xì)胞被隨機(jī)分為3組，并分別在37℃溫度下培養(yǎng)1、3、5小時后固定及免疫熒光染色，觀察其紡錘體及染色體的形態(tài)。 結(jié)果：融解后87.32％的MII期卵母細(xì)胞成活。

2、1小時培養(yǎng)組的卵母細(xì)胞的紡錘體正常率(28.57)和對照組(83.33％)、3小時組(65.00％)和5小時組(66.67[％])差異均有顯著性(Fisher精確概率法，P<0.05)。對照組、3小時組和5小時組之間差異均無顯著性。各組之間染色體形態(tài)差異無顯著性（Fisher精確概率法，P>0.051）。 結(jié)論：結(jié)果提示，MII期卵母細(xì)胞冷凍復(fù)蘇后至少要培養(yǎng)3小時以上，紡錘體重聚才能達(dá)到最大比例，因此臨床進(jìn)行ICSI的時間應(yīng)在培

3、養(yǎng)3小時后。而且，本試驗培養(yǎng)3小時和5小時組的紡錘體正常率分別達(dá)65％和66.67，與對照組差異無顯著性，說明恰當(dāng)?shù)睦鋬龇桨缚梢詼p少紡錘體的損傷。 研究背景：目前冷凍未成熟卵子成為研究焦點，但未成熟卵子冷凍融解后經(jīng)體外成熟后是否可以獲得正常形念的紡錘體和染色體構(gòu)型卻未得到肯定的結(jié)論。 方法：收集常規(guī)胞漿內(nèi)單精子顯微注射一胚胎移植(intracytoplasmicsperm injection-embryo transfe

4、r，ICSI-ET)術(shù)中不成熟的卵子并根據(jù)形念分為GV期卵子、MI期卵子，獲得的卵子隨機(jī)分為兩組，GV1組即GV期卵子體外培養(yǎng)36小時后成熟至MII期卵子者固定并進(jìn)行紡錘體和染色體的免疫熒光染色。GV2組經(jīng)慢速冷凍-快速融解后培養(yǎng)36小時成熟至M II期卵子者固定并進(jìn)行紡錘體和染色體的免疫熒光染色。M I期卵子分組同GV。 結(jié)果：68個GV卵子冷凍融解后成活55個，存活率80.88％，38個卵子成熟至M II期，成熟率為69.

5、09％。對照組GV卵子35個，26個卵子成熟至M II期，成熟率74.29％。40個M I期卵子冷凍融解后35個存活，存活率87.5％，24個成熟至M II期，成熟率為68.57％。對照組M I卵子25個，22個卵子成熟至MII期，成熟率88％。GVl和GV2組之間體外成熟率無統(tǒng)計學(xué)差異(卡方檢驗，P>0.05)；GVl和GV2組之間紡錘體形態(tài)和染色體形態(tài)正常率的比較有統(tǒng)計學(xué)差異(卡方檢驗，P<0.05)。同樣M I 1和M I 2組之

6、間體外成熟率無統(tǒng)計學(xué)差異(卡方檢驗，P>0.05)；M I 1和M I 2組之間紡錘體形態(tài)和染色體形態(tài)正常率的比較有統(tǒng)計學(xué)差異(卡方檢驗，P<0.05)。 結(jié)論：卵子冷凍由于未成熟卵子沒有紡錘體結(jié)構(gòu)并且其膜結(jié)構(gòu)具有不同的通透性等特點，所以被認(rèn)為會較少受到冷凍的損害，但是冷凍后未成熟卵子必須要經(jīng)過體外成熟這一關(guān)鍵過程，很大程度上降低了其優(yōu)勢。冷凍后未成熟卵母細(xì)胞形成正常減數(shù)分裂紡錘體的能力減弱，從而染色體的分布亦多異常。因此，應(yīng)