玻璃化冷凍保存小鼠GV期卵母細胞的研究.pdf

1、本實驗對影響玻璃化冷凍保存小鼠GV期卵母細胞效果的幾個因素進行了研究，如凍前預(yù)處理方法、卵母細胞形態(tài)、冷凍方法、解凍方法、基礎(chǔ)液、胎牛血清濃度等，目的在于篩選適合超低溫冷凍保存小鼠GV期卵母細胞的冷凍程序。研究結(jié)果如下： 1. 對小鼠Gv期裸卵進行不同的凍前預(yù)處理，用0PS法冷凍保存，解凍后繼續(xù)培養(yǎng)成熟，進行體外受精，根據(jù)卵裂率分析不同平衡方法對小鼠卵母細胞的毒性作用。結(jié)果表明，用EFS40一步法處理0.5min、imin、2m

2、in、3min后的卵裂率分別為7.35％、17.02％、12.12％、4.44％；將卵母細胞用EFS20處理O.5min、1min、2min、3min，再移入EFS40處理0.5min后，卵裂率分別為9.15％、10.08％、30.95％、12.41％。表明二步法優(yōu)于一步法。預(yù)處理最佳組合為EFS20(2min)+EFS40(0.5min)。 2. 將完整的卵丘一卵母細胞復(fù)合物和用吸管吹掉卵丘的裸卵分別進行玻璃化冷凍，培養(yǎng)成熟后

3、體外受精，卵裂率分別是23.17％、30.96％，差異不顯著(P>0.05)。兩者都與未經(jīng)冷凍保存的對照組(60.00％)有極顯著差異(P<0.01)。 3. 分別用straw法、OPS法、GMP法冷凍保存GV期卵母細胞，結(jié)果顯示，OPS法(33.07％)與GMP法(33.85％)差異不顯著(P>0.05)，GMP法略優(yōu)于OPS法，兩者與Straw法(10.37％)存在極顯著差異(P<0.01)。三種冷凍方法與未經(jīng)冷凍保存的對照

4、組(60.00％)存在極顯著差異(P<0.01)。 4. 分別用一步法、二步法和三步法對OPS法冷凍保存的GV期卵母細胞進行解凍，表明二步法解凍(33.62％)和三步法解凍(35.55％)卵裂率極顯著優(yōu)于一步法解凍卵裂率(12.50％)(P<0.01)，二步法解凍(33.62％)與三步法解凍(35.55％)卵裂率差異不顯著(P>0.05)。 5. 分別用DMEM和DPBS作為玻璃化冷凍液的基礎(chǔ)液，對GV期小鼠裸卵進行玻璃

5、化冷凍保存，結(jié)果表明，用DMEM(31.25％)或DPBS(30.28％)作為玻璃化冷凍液的基礎(chǔ)液效果差異不顯著(P>0.05)。 6. 在玻璃化液中添加不同濃度的胎牛血清的試驗顯示，玻璃化冷凍液中添加20％胎牛血清效果(33.58％)與不添加胎牛血清效果(6.92％)差異極顯著(P<0.01)，與添加10％胎牛血清效果(21.09％)差異顯著(O.OI0