玻璃化冷凍前熱應激處理對小鼠卵母細胞影響的初步研究.pdf

1、目的:以熱應激處理后小鼠MⅡ期卵母細胞熱休克蛋白70的表達特點，及對熱應激處理后進行玻璃化冷凍的卵母細胞存活率及細胞骨架的完整性進行綜合分析,探討熱應激處理小鼠MⅡ期卵母細胞對玻璃化冷凍的影響。
　　方法:以小鼠卵母細胞(MⅡ期)為研究對象，隨機分為：新鮮對照組、玻璃化冷凍組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組。⑴使用免疫熒光及Western-blotting方法測定并分析小鼠成熟卵子及熱休克處理后 HSP70的表

2、達特點及規(guī)律；⑵采用玻璃化冷凍方法保存熱休克處理后的小鼠MⅡ卵子，對復溫后卵子的存活率、細胞骨架（紡錘體和染色體）的完整性進行觀察和分析。
　　結果:HSP70免疫熒光結果顯示:新鮮對照組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組中蛋白信號主要均勻分布在胞質中，在染色體區(qū)無明顯分布。熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組相比,胞質內HSP70信號密度下降。WB結果顯示：熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜

3、黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組比較，HSP70的表達下降，無明顯差異（P＞0.05），熱休克處理后玻璃化冷凍組與姜黃素處理后玻璃化冷凍組無明顯差異（P>0.05）。玻璃化冷凍后卵母細胞存活率：玻璃化冷凍組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組相比較，卵母細胞的存活率均顯著降低（P<0.05），熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組的卵母細胞存活率較玻璃化冷凍組，無明顯差異（P＞0.05）。細胞骨

4、架分析：玻璃化冷凍組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組相比較，細胞骨架正常率均降低，有明顯差異（P<0.01）；熱休克處理后玻璃化冷凍組的卵母細胞細胞骨架正常率較玻璃化冷凍組有所下降，無明顯差異（P＞0.05），而姜黃素處理后玻璃化冷凍組的卵母細胞細胞骨架正常率明顯低于玻璃化冷凍組及熱休克處理后玻璃化冷凍組，有顯著差異（P＜0.05）。
　　結論:熱應激處理玻璃化冷凍前小鼠MⅡ期卵母細胞并不能提高小鼠