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文檔簡介
1、為了建立昆明小鼠胚胎冷凍經濟、有效、穩(wěn)定的方案,本研究以該品系小鼠體內受精胚胎(原核胚)為試驗材料,從胚胎回收、冷凍載體、冷凍保護劑等環(huán)節(jié)出發(fā),探討了昆明小鼠體內受精原核期胚胎經歷玻璃化冷凍保存后的發(fā)育能力。
論文包括五個試驗,具體研究結果如下:(1)研究了體重、激素注射量對昆明小鼠超排效果的影響。結果顯示:①體重<20g時,供體小鼠的超排效率顯著低于體重在20~31g的昆明小鼠(P<0.05);②使用5IU PMSG/h
2、CG,超排效率不如10IU PMSG/hCG。
(2)研究了開放式拉長細管法(Open pulled straws,OPS)與冷凍帽(Cryotop)兩種載體對小鼠原核期胚胎發(fā)育的影響。結果顯示:OPS組和Cryotop組解凍后胚胎的2-細胞率、4-細胞率和囊胚率分別為84.28% vs74.10%、57.35% vs65.87%、28.34% vs43.57%與對照組(81.19%、64.25%、40.04%)差異不顯著
3、(P>0.05),但Cryotop冷凍結果更接近對照組,效果較佳。
(3)研究了Cryotop與自制Cryotip載體對小鼠原核期胚胎發(fā)育效果的影響。結果發(fā)現(xiàn)我們自制的Cryotip玻璃化冷凍載體與成品載體冷凍解凍昆明小鼠原核期胚胎,經體外培養(yǎng),胚胎2-細胞率、4-細胞率、桑椹胚率和囊胚率差異都不顯著(P>0.05),但從數(shù)值上看,在自制Cryotip載體冷凍結果中,除了2-細胞發(fā)育率外,其他幾項結果都稍微高于成品組:桑椹
4、胚與囊胚率分別為63.84%、58.48%(自制Cryotip組為66.29%、62.72%)??梢?,自制載體冷凍效果不比成品冷凍效果差。
(4)研究了不同冷凍保護劑:15% EG+15% DMSO+蔗糖(EDS)與15%EG+15% PROH+蔗糖(EPS)對小鼠原核期胚胎發(fā)育效果的影響,結果發(fā)現(xiàn):①采用EPS與EDS兩種保護劑所獲得的胚胎回收率與存活率96.35%、84.83%(94.95%、95.83%)無顯著差異(
5、P>0.05);②冷凍解凍后胚胎2-細胞發(fā)育率60%、70%與對照組(92.50%)差異顯著(P<0.05),但冷凍組間無差異(P>0.05);③在囊胚發(fā)育率中,采用EDS組與對照組無顯著差異(56.35% vs76.90%)(P>0.05),但EPS組與對照組(33.84% vs76.90%)以及冷凍組之間(33.84% vs56.35%)差異顯著(P<0.05);④EDS組囊胚平均細胞數(shù)與EPS、對照組相比較差異顯著(P<0.05)
6、。結果可見采用EDS作冷凍保護劑對昆明小鼠原核期胚胎冷凍效果好于EPS方法。
(5)除了滲透性冷凍保護劑對冷凍效果有影響,滲透性保護劑與有很大的作用,本試驗以EG、DMSO為滲透性保護劑,研究了蔗糖與海藻糖對胚胎冷凍效果的影響,以及不同的胚胎體外培養(yǎng)密度:5枚/10μl、10枚/40μl、5枚/40μl(即構成1:2、1:4、1:8密度大?。ε咛グl(fā)育的影響。結果顯示采用蔗糖與海藻糖兩種保護劑所獲得的胚胎2-細胞率、4-細
7、胞率、桑椹胚率與囊胚率(70% vs67.5%;69.04% vs72.44%;57.22% vs58.75%;54.05% vs53.83%)上均無顯著差異(P>0.05),而且數(shù)值差別非常的小,說明蔗糖與海藻糖都能很好地作為昆明小鼠原核期胚胎冷凍保護劑,而且效果好;解凍后胚胎在1:2、1:4、1:8密度大小的KSOM-AA培養(yǎng)液中培養(yǎng)所獲得的胚胎2-細胞率、4-細胞率、桑椹胚率以及囊胚率無顯著差異(P>0.05)。
綜
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