小鼠和貴州香豬胚胎玻璃化冷凍保存相關(guān)技術(shù)研究.pdf

1、為了解決我國動物遺傳資源急速衰減及挽救瀕危品種提供了新的思路和方法為胚胎冷凍提供研究方法。本實驗對小鼠胚胎玻璃冷凍保存及相關(guān)技術(shù)進行了系統(tǒng)的研究，具體內(nèi)容包括：熒光雙色法檢測冷凍前后小鼠胚胎活力；不同冷凍方法及冷凍保存時間對胚胎發(fā)育率的影響；冷凍后胚胎細胞損傷檢測，并在其基礎上對貴州地方豬種劍白香豬胚胎玻璃化冷凍技術(shù)進行初步了的探索。試驗結(jié)果如下： 熒光物質(zhì)FDA和PI能對不同活力胚胎進行標記，且在一定濃度范圍內(nèi)FDA對胚胎無毒

2、副作用，PI對透明帶完整的胚胎也無毒副作用。 胚胎冷凍效果好壞主要取決于玻璃化冷凍液，當玻璃化冷凍液對胚胎有很好的冷凍保護時，承載工具對胚胎冷凍效果影響不大，當玻璃化冷凍液對胚胎冷凍保護效果稍差時，承載工具的優(yōu)越性才得以體現(xiàn)。但是，胚胎冷凍對小鼠桑葚胚的細胞膜的完整性、細胞內(nèi)酯酶活性及線粒體分布功能均有影響，只是冷凍效果好的冷凍方法對細胞膜的完整性、細胞內(nèi)酯酶活性及線粒體分布的影響小。同時以25％Gly+25％EG+50％mCZ

3、B為胚胎冷凍保護劑，采用細管法冷凍小鼠桑葚胚，在-196℃冷凍保存1天、10天、20天和30天解凍后對胚胎的發(fā)育率沒有影響?；谏鲜鲅芯勘緦嶒灥贸鲚^為優(yōu)化的小鼠桑葚胚冷凍方法是以玻璃化冷凍液(25％Gly+25％EG+50％mCZB)作為冷凍保護劑的細管法。 以10％EG+10％DMSO+0.6M(蔗糖)(基礎液為M199)為玻璃化冷凍液，采用離心+CB處理胚內(nèi)脂肪后冷凍和直接冷凍兩種方法冷凍貴州劍白香豬4-細胞胚胎，解凍后胚胎