小鼠和貴州香豬胚胎玻璃化冷凍保存相關(guān)技術(shù)研究.pdf

1、為了解決我國(guó)動(dòng)物遺傳資源急速衰減及挽救瀕危品種提供了新的思路和方法為胚胎冷凍提供研究方法。本實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠胚胎玻璃冷凍保存及相關(guān)技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，具體內(nèi)容包括：熒光雙色法檢測(cè)冷凍前后小鼠胚胎活力；不同冷凍方法及冷凍保存時(shí)間對(duì)胚胎發(fā)育率的影響；冷凍后胚胎細(xì)胞損傷檢測(cè)，并在其基礎(chǔ)上對(duì)貴州地方豬種劍白香豬胚胎玻璃化冷凍技術(shù)進(jìn)行初步了的探索。試驗(yàn)結(jié)果如下： 熒光物質(zhì)FDA和PI能對(duì)不同活力胚胎進(jìn)行標(biāo)記，且在一定濃度范圍內(nèi)FDA對(duì)胚胎無(wú)毒

2、副作用，PI對(duì)透明帶完整的胚胎也無(wú)毒副作用。 胚胎冷凍效果好壞主要取決于玻璃化冷凍液，當(dāng)玻璃化冷凍液對(duì)胚胎有很好的冷凍保護(hù)時(shí)，承載工具對(duì)胚胎冷凍效果影響不大，當(dāng)玻璃化冷凍液對(duì)胚胎冷凍保護(hù)效果稍差時(shí)，承載工具的優(yōu)越性才得以體現(xiàn)。但是，胚胎冷凍對(duì)小鼠桑葚胚的細(xì)胞膜的完整性、細(xì)胞內(nèi)酯酶活性及線(xiàn)粒體分布功能均有影響，只是冷凍效果好的冷凍方法對(duì)細(xì)胞膜的完整性、細(xì)胞內(nèi)酯酶活性及線(xiàn)粒體分布的影響小。同時(shí)以25％Gly+25％EG+50％mCZ

3、B為胚胎冷凍保護(hù)劑，采用細(xì)管法冷凍小鼠桑葚胚，在-196℃冷凍保存1天、10天、20天和30天解凍后對(duì)胚胎的發(fā)育率沒(méi)有影響。基于上述研究本實(shí)驗(yàn)得出較為優(yōu)化的小鼠桑葚胚冷凍方法是以玻璃化冷凍液(25％Gly+25％EG+50％mCZB)作為冷凍保護(hù)劑的細(xì)管法。 以10％EG+10％DMSO+0.6M(蔗糖)(基礎(chǔ)液為M199)為玻璃化冷凍液，采用離心+CB處理胚內(nèi)脂肪后冷凍和直接冷凍兩種方法冷凍貴州劍白香豬4-細(xì)胞胚胎，解凍后胚胎