卵巢組織的玻璃化冷凍保存技術(shù)研究.pdf

1、目的：探討使用玻璃化冷凍技術(shù)對卵巢組織的冷凍保存效果。尋找對卵巢組織更為適宜的冷凍保護(hù)液配方。
　　 方法：收集10-14dpc ICR小鼠的卵巢和2例人卵巢組織標(biāo)本(切成約1×1×1-2mm3組織塊)，采用四種不同的玻璃化冷凍保護(hù)液：40％乙二醇+18％Ficoll-70+0.3M蔗糖；40％丙二醇+18％Ficoll-70+0.3M蔗糖；2.62M二甲基亞砜+1.31M丙二醇+0.0075M聚乙二醇+2.6M乙酰胺；1.5M

2、丙二醇+0.1M蔗糖對卵巢組織進(jìn)行-205℃表面玻璃化冷凍。通過對冷凍復(fù)蘇前后小鼠卵泡的活性和人卵巢組織形態(tài)學(xué)評價，對冷凍保存效果進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果：在小鼠卵巢組織玻璃化冷凍實驗中，比較了四種玻璃化冷凍保護(hù)液冷凍保存小鼠卵巢的竇前卵泡的復(fù)蘇率和體外培養(yǎng)的貼壁率，兩兩之間均有顯著性差異(P＜0.01)。其中冷凍保護(hù)液A的復(fù)蘇率和1天、5天卵泡貼壁率分別為55.13％、30.90％和27.05％，標(biāo)準(zhǔn)差(SD)分別為為4.72、

3、1.60和4.28，變異系數(shù)(CV)分別為為8.56、5.18和15.82；冷凍保護(hù)液B的復(fù)蘇率和1天、5天卵泡貼壁率分別為42.74％、25.05％和18.47％，標(biāo)準(zhǔn)差(SD)分別為3.30、5.27和5.02，變異系數(shù)(CV)分別為7.72、21.02和27.19；冷凍保護(hù)液C的復(fù)蘇率和1天、5天貼壁率分別為62.79％、39.39％和32.68％，標(biāo)準(zhǔn)差(SD)分別為5.83、2.37和3.13，變異系數(shù)(CV)分別為9.28、

4、6.02和9.59；冷凍保護(hù)液D的復(fù)蘇率和1天、5天貼壁率分別為23.89％、13.31％和7.87％，標(biāo)準(zhǔn)差(SD)分別為3.90、3.67和2.50，變異系數(shù)(CV)分別為16.31、27.55和31.79。冷凍保護(hù)液C的冷凍保存效果最好。在人卵巢組織玻璃化冷凍實驗中，各冷凍保護(hù)液組與正常組織有明顯的差異(P＜0.005)。冷凍保護(hù)液C的冷凍保護(hù)效果最好(P＜0.005)，冷凍復(fù)蘇后的組織中有63.41％的卵泡形態(tài)正常，在新鮮組織組