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文檔簡介
1、目的:通過氣管內(nèi)灌注鹽酸博萊霉素建立小鼠肺纖維化模型。觀察格列衛(wèi)對小鼠肺纖維化的干預(yù)效果并探討其作用機制,為肺纖維化的治療提供新的思路。 方法:健康雌性C57BL/6 小鼠腹腔注射水合氯醛麻醉,經(jīng)氣管穿刺注入鹽酸博萊霉素(5mg/kg), 直立旋轉(zhuǎn)動物制造肺纖維化疾病模型。120只C57BL/6小鼠隨機分為對照組、模型組、地塞米松組和格列衛(wèi)組,每組各30只。模型組、地塞米松組和格列衛(wèi)組按上述方法復(fù)制動物模型,對照組氣管內(nèi)注射等量
2、的無菌生理鹽水代之。模型建立24 h后腹腔內(nèi)注射干預(yù)藥物,每日一次,格列衛(wèi)組為格列衛(wèi)50mg/kg/d,地塞米松組為地塞米松3mg/kg/d,模型組注入等量的無菌生理鹽水。每組分別于第7、14、21天各處死10只動物。肺組織進行HE染色及Masson三聯(lián)染色, 觀察各組肺組織病理變化并評估炎癥和肺纖維化程度;堿水解法測定肺組織羥脯氨酸(HYP)含量;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定肺組織勻漿中PDGF-BB、TGF-β1含量;免疫組化法
3、動態(tài)觀察肺組織中MMP-1、TIMP-1、TGF-β1、α-SMA的表達并行相關(guān)性分析。 結(jié)果: (1)病理學(xué)半定量分析顯示地塞米松組和格列衛(wèi)組肺組織炎癥和纖維化程度較模型組減輕。 (2)ELISA檢測顯示地塞米松和格列衛(wèi)組各時間點的PDGF-BB含量均低于模型組,且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異;第21天地塞米松組、格列衛(wèi)組和對照組三組之間無顯著差別。 (3)模型組和地塞米松及格列衛(wèi)三組各時間點肺組織TGF-β1
4、含量均高于對照組;地塞米松和格列衛(wèi)組各時間點含量均低于模型組,且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。 (4) MMP-1蛋白表達的半定量分析結(jié)果顯示,模型組第7天表達量最高,此后逐漸降低,且其各時間點表達均高于對照組;地塞米松和格列衛(wèi)組7天和14天MMP-1表達量均低于模型組,且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。 (5)TIMP-1蛋白表達的半定量分析結(jié)果顯示,第7天模型組TIMP-1蛋白表達開始明顯增加,此后逐漸升高,與對照組差異顯著;地塞米松
5、和格列衛(wèi)組各時間TIMP-1的表達較模型組均明顯降低,且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。 (6)TGF-β1表達的半定量分析結(jié)果顯示,模型組各時間點表達量均高于對照組;地塞米松和格列衛(wèi)組各時間點TGF-β1表達量均低于模型組,且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。 (7)ɑ-SMA表達的半定量分析結(jié)果顯示,第7天模型組ɑ-SMA表達開始明顯增加,此后逐漸升高,與對照組差異顯著;地塞米松和格列衛(wèi)組各時間ɑ-SMA的表達較模型組均明顯降低,且兩組之
6、間無統(tǒng)計學(xué)差異。 (8)TGF-β1與TIMP-1免疫組化半定量的相關(guān)性分析提示兩者有統(tǒng)計學(xué)意義,成正相關(guān)。 (9) MMP-1與TIMP-1免疫組化半定量相關(guān)性分析證明兩者成負相關(guān)。 (10)TGF-β1與ɑ-SMA免疫組化半定量的相關(guān)性分析顯示兩者成正相關(guān)。 結(jié)論: (1)格列衛(wèi)對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠有明顯減輕其炎癥和纖維化程度的作用。 (2)PDGF-BB和TGF-β1在肺纖維化動物模
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